傳染性法氏囊病病毒VP2基因高變區(qū)和BC6-85株全基因組序列分析及亞單位疫苗的研究.pdf

1、傳染性法氏囊病(Infectious bursal disease，IBD)是由傳染性法氏囊病病毒(Infectious bursaldisease virus，IBDV)引起的雞和火雞的一種急性、高度接觸性傳染病，除直接引起雞死亡和生產(chǎn)性能下降外，還可導(dǎo)致感染雞免疫抑制。本實(shí)驗(yàn)對(duì)IBDV不同毒株VP2基因高變區(qū)和BC6/85株基因組進(jìn)行序列分析，并利用原核表達(dá)載體制備亞單位疫苗，獲得了以下的結(jié)果：
　　 (1)以實(shí)驗(yàn)室保存的I

2、BDV超強(qiáng)毒株、經(jīng)典毒株及弱毒株為研究對(duì)象，對(duì)其VP2高變區(qū)進(jìn)行序列分析，發(fā)現(xiàn)不同類型的毒株VP2氨基酸序列有規(guī)律的變化。根據(jù)VP2高變區(qū)核苷酸序列(435bp)構(gòu)建遺傳進(jìn)化樹(shù)，結(jié)果表明：所有的血清Ⅰ型均由同一祖先序列演化而來(lái)；除BC6/85等4毒株外，其余毒株分為三個(gè)大進(jìn)化群，第一進(jìn)化群包括弱毒株和變異毒株，第二進(jìn)化群為經(jīng)典毒株，第三進(jìn)化群為vvIBDV。
　　 (2)首次克隆了IBDV標(biāo)準(zhǔn)攻毒株(BC6/85株)的全基因組，

3、并進(jìn)行了序列分析，發(fā)現(xiàn)在A、B節(jié)段核苷酸與經(jīng)典毒株、變異株和弱毒株同源性較高，與超強(qiáng)毒株同源性較低；與已發(fā)表的三大進(jìn)化群參考毒株的A、B片段氨基酸序列分析比較，BC6/85株共有21個(gè)特有氨基酸，VP1有3個(gè)，VP2有11個(gè)，VP5有3個(gè)，VP3有1個(gè)以及VP4有3個(gè)；與VP2氨基酸序列比較，VP1、VP3、VP5和VP4氨基酸序列較為保守。
　　 (3)將BC6/85株VP2基因克隆到原核表達(dá)載體pET-28a，成功構(gòu)建了VP

4、2基因原核表達(dá)載體pET-VP2。表達(dá)蛋白以包涵體形式存在于宿主菌中，能夠與雞IBDV抗血清發(fā)生特異性反應(yīng)。將包涵體及變性復(fù)性處理后的蛋白以不同劑量免疫接種3周齡SPF雞，并于首免后14天翅下靜脈采血檢測(cè)血清抗體，21天后攻毒。結(jié)果顯示：免疫組的血清抗體水平顯著高于對(duì)照組；攻毒試驗(yàn)結(jié)果表明：處理組(分別為160μg、320μg和640μg)和包涵體組(720μg和1440μg)保護(hù)率均達(dá)100％，包涵體360μg組保護(hù)率為90％，對(duì)照組