采后梨果實糖代謝及酸性轉(zhuǎn)化酶基因克隆表達的研究.pdf

1、論文以采后黃冠梨果實為試驗材料，采用2％CaCl2和1％普魯蘭多糖涂膜處理，研究不同處理對梨果實貯藏期間糖代謝及相關酶活性的影響，同時克隆糖代謝關鍵酶酸性轉(zhuǎn)化酶的基因(AIV)并進行表達分析，為進一步闡明采后梨果實糖代謝機理，從分子水平揭示果實風味品質(zhì)機制以及進行梨果實品質(zhì)改良奠定基礎，具有較高的理論和生產(chǎn)應用價值。
　　 本研究優(yōu)化了梨果實糖類高效液相色譜分析條件。流動相：乙腈(色譜純)：超純水，檢測器：RID示差檢測器，柱溫

2、：35℃，流速：1.0mL/min。
　　 不同處理對梨果實生理生化指標影響的研究表明：普魯蘭多糖處理和鈣處理均能明顯抑制采后梨果實的呼吸作用，延緩果實可滴定酸和總可溶性固形物含量的下降，進而延緩梨果實的后熟和衰老進程，改善梨果實的采后品質(zhì)。
　　 不同處理對糖代謝及其相關酶活性影響的研究表明：普魯蘭多糖處理和鈣處理均能顯著(P<0.05)或極顯著(P<0.01)地延緩AJ、NI、SS和SPS活性的下降。綜合分析各種感官

3、及理化指標，鈣處理可以應用于生產(chǎn)實踐中維持梨果實貯藏期間的優(yōu)良品質(zhì)。
　　 采后梨果實糖含量的變化是多種酶共同作用的結(jié)果。相關性分析結(jié)果表明，作為梨果實糖代謝的相關酶，AI、NI、SS、SPS在黃冠梨果實糖代謝的過程中均具有重要的功能，其中，AI和SS是黃冠梨果實糖代謝的關鍵酶。
　　 梨富含多糖和酚類物質(zhì)，RNA提取難度較大，本研究在傳統(tǒng)CTAB法的基礎上進行了改進。結(jié)果表明：采用改進CTAB法提取的RNA完整性好、條

4、帶清晰、無明顯降解，且28S和18S RNA的亮度比約為2:1，A260/A280為1.913。
　　 根據(jù)GenBank中登錄的酸性轉(zhuǎn)化酶基因序列設計特異性引物，以RNA逆轉(zhuǎn)錄后得到的cDNA為模板，通過RT-PCR擴增獲得長度為429bp的酸性轉(zhuǎn)化酶基因片段。核酸序列同源性檢索表明，AIV與砂梨(BAG30919.1)的PsS-AIV1司源性為95％，與葡萄(AAB47171.1)的GIN1同源性為83％。
　　 采