梨木質(zhì)素合成關(guān)鍵酶基因的克隆和表達(dá)分析.pdf

1、以黃金梨（Pyrus pyrifolia.Nakai.Whangkeumbae）果實(shí)為試材，利用RT-PCR、RACE方法，進(jìn)行了梨木質(zhì)素合成相關(guān)酶包括苯丙氨酸解氨酶(PAL)、4-香豆酸輔酶A連接酶(4CL)、肉桂醇脫氫酶(CAD)和過氧化物酶(POD)基因的同源克隆，通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，以梨actin基因?yàn)閮?nèi)參，分析了各基因在果實(shí)的不同發(fā)育成熟階段的表達(dá)特性以及外源GA處理對基因表達(dá)特性的影響，以期為調(diào)控木質(zhì)素生物合成、改善

2、果實(shí)品質(zhì)提供理論依據(jù)。
　　 先后從黃金梨果肉中共分離出10個(gè)cDNA，經(jīng)NCBIBlast,其中3個(gè)基因cDNA在梨中已有報(bào)道，另外7個(gè)cDNA全長序列在梨中為首次獲得，暫命名為Pp4CL1，Pp4CL2，PpCAD1，PpPOD1，PpPOD2，PpPOD3，PpPOD4.基因序列分析表明:PpPAL1與PpPAL2之間的氨基酸同源性為84％，PpPAL1與西洋梨（Pyrus communis）PAL(ABB70117.2)

3、的氨基酸同源性最高，為99％;PpPAL2與枇杷（Eriobotryajaponica）PAL1(ABV44808.1)的同源性為99％;Pp4CL1與Pp4CL2之間的氨基酸同源性為66.5％，Pp4CL1基因與歐洲花楸(Sorbus aucuparia)4CL1基因在氨基酸水平上的同源性為99％，Pp4CL2基因與歐洲花楸(Sorbus aucuparia)4CL2基因的同源性為96％;PpCAD基因與蘋果（Malusx domes

4、tica）CAD(AF053084.1))氨基酸同源性最高，為97％;而4個(gè)POD基因之間的同源性為44.5％，PpPOD1與荔枝（Litchi chinensis）POD5(FJ207518.2)同源性最高，為73％;PpPOD4與大豆（Glycine max）POD(AF145348.1)同源性最高，為82％;PpPOD2與PpPOD3與近緣植物POD基因的氨基酸同源性較低，PpPOD2與蓖麻(Ricinus communis)PO

5、D(XM_002510541.1)同源性最高，為46％;PpPOD3與柑橘(Citrus maxima)POD1(DQ650639.1)、荔枝(Litchi chinensis)POD2(FJ157350.1)同源性最高，為67％。
　　 RealtimePCR分析結(jié)果表明:PpPAL1與PpPAL2在整個(gè)果實(shí)生長發(fā)育階段的表達(dá)模式基本相同，果實(shí)發(fā)育初期，基因表達(dá)量較高，隨著果實(shí)的生長發(fā)育，逐漸下降，花后85d之后維持較低的基因

6、表達(dá)水平。Pp4CL1與Pp4CL2在果實(shí)發(fā)育初期有較高的表達(dá)水平，而在果實(shí)發(fā)育后期，基因相對表達(dá)量極低，甚至未檢出。PpCAD1基因在果實(shí)發(fā)育進(jìn)程中有兩次峰值出現(xiàn)，幼果期表達(dá)量較低，隨著果實(shí)的迅速生長，基因表達(dá)水平上升，隨著果實(shí)進(jìn)入緩慢生長期，基因表達(dá)表現(xiàn)出先下降，后上升至一峰值，隨后下降至較低表達(dá)水平直至果實(shí)成熟;PpCAD2基因相對表達(dá)量高于PpCAD1，花后逐漸上升，52d達(dá)到峰值，之后逐漸下降，花后84d后至果實(shí)成熟，維持在較