靈芝木質(zhì)素降解酶系相關(guān)基因的克隆與酵母表達(dá).pdf

1、白腐真菌具有較強(qiáng)降解木質(zhì)纖維素的能力，靈芝屬是白腐真菌中的一大類，對其分類，降解木質(zhì)纖維素高產(chǎn)菌株篩選方法和相關(guān)基因的系統(tǒng)研究，對利用靈芝降解木質(zhì)纖維素和環(huán)境應(yīng)用有著積極的推動作用。
　　該研究利用靈芝中的真菌免疫調(diào)節(jié)蛋白(FIP)基因、細(xì)胞核核糖體ITS1-5.8S-ITS2序列和線粒體核糖體小亞基V4-V6區(qū)（mt SSU rDNA V4-V6）序列分析了20個靈芝菌株的遺傳多樣性;在此基礎(chǔ)上建立了從靈芝中篩選漆酶高產(chǎn)菌株的方

2、法，利用外顯子拼接法和cDNA末端快速擴(kuò)增技術(shù)分別克隆了靈芝菌株漆酶(Lac)和靈芝錳過氧化酶(MnP)基因序列，并將兩個基因在畢赤酵母中進(jìn)行了表達(dá)。
　　研究結(jié)果表明:
　　①不同的標(biāo)記基因?qū)`芝區(qū)分能力不同;
　?、陟`芝00679產(chǎn)漆酶能力最強(qiáng);克隆到的靈芝00679和靈芝50817菌株漆酶cDNA全長序列分別為1566bp和1563bp，編碼521和520個氨基酸，均屬于多銅氧化酶家族;構(gòu)建了靈芝00679漆酶

3、基因(GlLac)表達(dá)載體pPICZαA-GlLac，并在畢赤酵母X33中進(jìn)行了有效表達(dá);
　?、劭寺〉降撵`芝錳過氧化物酶cDNA序列全長1337bp，編碼363個氨基酸，蛋白質(zhì)包括一個木質(zhì)素氧化酶的催化位點，屬于類似于植物的氧化酶超家族;構(gòu)建了靈芝MnP的酵母表達(dá)載體pAO815-GlMnP，成功轉(zhuǎn)化畢赤酵母SMD1168，表達(dá)出了有活性的靈芝錳過氧化物酶。
　　主要結(jié)論:使用FIP基因可區(qū)分赤芝組和紫芝組，使用細(xì)胞核核糖