駱駝盤尾絲蟲病流行病學(xué)及病原rDNA-ITS序列研究.pdf

1、駱駝盤尾絲蟲（Onchocerca of camels）是一種寄生于駱駝體內(nèi)的白色絲狀線蟲，其成蟲寄生在駱駝的皮下組織、肌腱及韌帶等部位，最終導(dǎo)致宿主寄生部位形成纖維組織結(jié)節(jié)，對(duì)駝肉的品質(zhì)、皮革質(zhì)量以及駱駝的生長(zhǎng)和發(fā)育都會(huì)產(chǎn)生不利的影響，給養(yǎng)駝業(yè)帶來較大的經(jīng)濟(jì)損失。目前，對(duì)于該病的病原、傳播媒介以及生前診斷和預(yù)防的研究，在國內(nèi)外幾乎是一片空白，而流行病學(xué)調(diào)查和蟲種鑒定以及系統(tǒng)發(fā)生研究是駱駝盤尾絲蟲病防控的重要基礎(chǔ)。本研究從內(nèi)蒙古養(yǎng)駝業(yè)生

2、產(chǎn)實(shí)際出發(fā)，主要從以下幾個(gè)方面入手，對(duì)駱駝盤尾絲蟲病進(jìn)行了研究。
　　首先采用寄生蟲學(xué)剖解技術(shù)，調(diào)查了內(nèi)蒙古兩個(gè)駱駝主產(chǎn)區(qū)（阿拉善地區(qū)和巴彥淖爾地區(qū)）駱駝盤尾絲蟲病的流行狀況。共剖解駱駝64峰，結(jié)果顯示，內(nèi)蒙古地區(qū)駱駝盤尾絲蟲的平均感染率為92％，最大感染強(qiáng)度為23個(gè)蟲結(jié)/峰，蟲結(jié)平均大小為38×20×9（mm3）。
　　對(duì)所檢獲的盤尾絲蟲結(jié)節(jié)進(jìn)行胃蛋白酶消化處理，首次在雙峰駝體內(nèi)檢獲了完整的盤尾絲蟲雌蟲和雄蟲，并對(duì)成蟲和微

3、絲蚴的形態(tài)進(jìn)行了詳細(xì)的描述。且在形態(tài)學(xué)鑒定的基礎(chǔ)上，運(yùn)用PCR方法擴(kuò)增該盤尾絲蟲的線粒體16S rRNA基因，對(duì)其進(jìn)行克隆與測(cè)序，在分子水平上進(jìn)行了蟲種確認(rèn)。結(jié)果表明，駱駝盤尾絲蟲種類為福斯盤尾絲蟲（Onchocerca fasciata）。
　　隨后，以線蟲通用引物NC5和NC2擴(kuò)增福斯盤尾絲蟲rDNA的內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)ITS1和ITS2以及5.8S基因序列。結(jié)果顯示，其核苷酸序列片段長(zhǎng)度分別為412bp、341bp和157bp。以

4、ITS2為研究對(duì)象，比較其與盤尾絲蟲屬其他蟲種的同源性，并構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，結(jié)果表明，在所比較的各盤尾絲蟲蟲種間，同源性在93.2%～97.3%范圍內(nèi)，而且顯示O.linealis為最原始的進(jìn)化種，O.fasciata、O.gibsoni和O.gutturosa則進(jìn)化較慢。
　　根據(jù)福斯盤尾絲蟲rDNA ITS序列，設(shè)計(jì)了福斯盤尾絲蟲種特異性引物OFIs和OFIas，并對(duì)蟲體基因組DNA進(jìn)行了擴(kuò)增，產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳后，可見一條約