致暈方法影響肉仔雞肉品質(zhì)的機理及脂質(zhì)過氧化調(diào)控.pdf

1、本論文對當前市場上最常見的兩種致暈類型--電致暈和氣致暈進行了研究。全文分6個試驗，采用分光光度、放射性免疫、冰凍切片、免疫組化、反相高效液相色潛、電子自旋共振波譜(ESR)、實時熒光定量PCR等方法系統(tǒng)研究了致暈方法對肉仔雞肉品質(zhì)的影響并初步探討了其營養(yǎng)調(diào)控機制。論文首先研究了不同電、氣致暈參數(shù)對肉仔雞肉品質(zhì)的影響，在此基礎(chǔ)上，對兩種致暈方法作了參數(shù)優(yōu)化；然后，從能量代謝和脂質(zhì)過氧化代謝的角度對電致暈和氣致暈方法的影響進行了對比；接著

2、，分別研究了MAPK-Nrf2/ECH-ARE信號轉(zhuǎn)導通路對活性氧的產(chǎn)生和消除的作用，探討了致暈方法影響肌肉脂質(zhì)過氧化的深層機制；最后，通過在肉仔雞日糧中添加抗氧化劑維生素E(VE)，研究了VE對致暈造成的脂質(zhì)過氧化損傷的緩解作用，并從MAPK-Nrf2/ECH-ARE信號轉(zhuǎn)導通路的角度探討了VE調(diào)節(jié)肌肉抗氧化能力的機制。
　　 試驗一旨在探究電流參數(shù)(低電流和高頻率)對肉仔雞肉品質(zhì)、糖酵解潛能和血液指標的影響。研究了35 V，

3、46 mA；50 V，67 mA；和65 V，86 mA與160 Hz，400 Hz，和1，000 Hz的9種組合方式。54只肉仔雞在被電流致暈18秒后采用頸部放血屠宰。屠宰后45分鐘和24小時之內(nèi)取胸肌和大腿肌肉測定肉品質(zhì)，取脛骨前肌肉測定糖酵解潛能。試驗表明，總體上高頻率降低了胸肌中的剪切力(400 Hz和1，000 Hz vs.160 Hz，以及腿肌中的烹煮損失(1，000 Hz vs.160 Hz和400 Hz)(P<0.01)

4、。當電流較高時(50 V，67 mA，，65 V，86 mA)高頻率(400 Hz和1，000 Hz)有降低胸肌中的剪切力的效果(P<0.01)；但當電流強度較低時(35 V，47 mA)高頻率(1，000 Hz)導致剪切力增加(P<0.01)。1，000 Hz(vs.160 Hz)降低了胸肌中糖原和糖酵解潛能(P<0.05)。較高的致暈電流(≥50 V，67 mA)降低了血漿皮質(zhì)酮的水平(P<0.05)，但頻率對血漿皮質(zhì)酮的影響不顯著

5、。電流強度和頻率互作影響了血漿葡萄糖、胸肌24h紅度值、剪切力，腿肌的極限pH，以及腿肌的糖酵解潛能。本研究表明，在電流強度不太低(50 V，67 mA以上)的情況下采用高頻率(400和1，000 Hz)致暈具有改善肉品質(zhì)的作用。
　　 試驗二旨在探討不同濃度的二氧化碳對肉仔雞血液指標、糖酵解潛能，和熱剔骨后肉品質(zhì)的影響?？偣?0只肉仔雞分別分配到5個處理：40％CO2+30％O2+N2(對照組)；30％CO2+21％O2+N2

6、(G30％)；40％CO2+21％O2+N2(G40％)；50％CO2+21％O2+N2(G50％)；60％CO2+21％O2+N2(G60％)。屠宰后后45分鐘和24小時之內(nèi)取胸肌和腿肌測定測定肉品質(zhì)及糖酵解潛能。試驗表明，60％的二氧化碳致暈導致胸肌(vs.G30％和G40％)和腿肌(vs.G40％)中的極限PH降低(P<0.05)，胸肌的(vs.G30％)滴水損失率增加(P=0.01)。50％二氧化碳導致腿肌的滴水損失率高于30％

7、組，并且屠宰后24h的胸肌比30％和40％二氧化碳致暈組更蒼白(亮度值更高)(P<0.01)。與對照相比，40％二氧化碳有降低腿肌24h蒼白度的趨勢(P<0.10)。G30％和G40％導致胸肌糖酵解潛能低于G60％，而腿肌中的糖酵解潛能在G30％最低(P<0.01)。血漿皮質(zhì)酮、血漿葡萄糖、宰后45min的肉品質(zhì)(pH、亮度、紅度，黃度)不受二氧化碳水平的影響(P>0.05)。本研究表明，低濃度二氧化碳(30％，40％)具有提高肉品質(zhì)的

8、作用，但與較高濃度的二氧化碳相比對緩解動物應(yīng)激沒有優(yōu)勢。
　　 試驗三比較了高碳酸血正常氧濃度的氣致暈和低電流、高頻率電致暈對屠宰后肌肉糖代謝和能量代謝的影響?？偣矊?6只肉仔雞施以6個處理：不致暈直接宰殺(對照組)；40％CO2+21％O2+N2(G40％)；60％CO2+21％O2+N2(G60％)；35 V，47 mA，400 Hz(E35V)；50 V，67 mA，160 Hz(E50V)；65 V，86 mA，1000

9、 Hz(E65V)。屠宰后45分鐘內(nèi)取胸肌和脛骨前肌儲存于-80℃。試驗表明，與電致暈和對照組相比，所有氣致暈組都造成全血pH值降低(P<0.01)。電致暈和氣致暈對血漿指標、糖酵解潛能、磷酸腺苷、纖維密度沒有顯著影響。與對照相比，G40％和E35V造成血漿乳酸含量增加，E35V還造成血漿尿素氮和尿酸增加(P<0.05)；E35V和E50V降低了ⅡB型纖維的密度(P<0.05)；G60％導致胸肌中GP增加，而除了E50V之外的所有致暈處

10、理都導致腿肌中的GP降低(P<0.01)。與較高的電流強度(E50V和E65V)相比，G40％降低了胸肌中的能量水平(ATP降低，AMP和AMP/ATP升高，P<0.05)。但是，氣致暈和較低電流強度(E35V)的電致暈相比，無論胸肌還是腿肌中磷酸腺苷的水平都沒有顯著差異。本研究表明，采用低電流強度、高頻率的電致暈與采用高碳酸血正常氧濃度的氣致暈相比，肉仔雞肌肉的糖代謝和能量代謝沒有本質(zhì)區(qū)別。從能量代謝的角度來看，G40％是較優(yōu)的致暈參

11、數(shù)組合。
　　 試驗四對高碳酸血正常氧濃度氣體致暈和低電流、高頻率的致暈對屠宰后肌肉脂質(zhì)過氧化的影響做了比較，并通過血液指標、肌肉活性氧(ROS)和硫代巴比妥酸反應(yīng)產(chǎn)物濃度、肌肉纖維類型比例以及家禽解耦聯(lián)蛋白(avUCP)、家禽腺苷轉(zhuǎn)位因子(avANT)、過氧化物酶體增殖物激活受體γ輔激活因子1α(avPGC-1α)的mRNA水平探討了可能的作用機制?？偣矊?6只雞給以6種處理：不致暈(對照)；40％CO2+21％O2+N2(G

12、40％)；60％CO2+21％O2+N2(G60％)；35 V，47 mA，400Hz(E35V)；50 V，67 mA，160 Hz(E50V)；65 V，86 mA，1000 Hz(E65V)。氣致暈導致屠宰后45min腿肌中活性氧水平和胸肌中TBARS水平降低。但是宰后24h胸肌和腿肌中TBARS含量不受致暈類型的影響。與電致暈相比，氣致暈誘導avUCP mRNA(胸肌1.47倍，腿肌2.41倍)和avPGC-1α mRNA(胸肌

13、1.42倍，腿肌2.08倍)表達量上升。本研究表明，與低電流+高頻率的電致暈相比，高碳酸血正常氧濃度氣致暈通過上調(diào)avUCP和avPGC-1α使屠宰后45min的活性氧產(chǎn)量和脂質(zhì)過氧化程度降低，但是24h后不同致暈類型對脂質(zhì)過氧化沒有顯著影響。
　　 試驗五從抗氧化酶(SOD)、二相酶(GST)和調(diào)控它們表達的MAPK-Nrf2/ECH-ARE信號轉(zhuǎn)導通路的角度著手，研究了不同致暈方法對肉仔雞肌肉在儲存期間肉色和脂質(zhì)氧化的影響及

14、脂質(zhì)過氧化物清除的機制。對共計30只從肉仔雞分別施以5種處理：不致暈(對照)，G40％=40％CO2+21％O2+N2；G79％=79％CO2+21％O2；E65V=65 V，86 mA，1000 Hz；E150V=150 V，130 mA，60 Hz。試驗結(jié)果表明，與對照組相比，E65V導致血清尿酸升高。在屠宰后9天胸肌中G40％亮度(L*，表明蒼白)最低，E150V亮度最高(P<0.01)；屠宰后6天和9天G79％和E150V導致胸

15、肌褪色程度最高(P<0.05)。在致暈處理的胸肌中，640％導致在屠宰后的45min、3天、6天、9天的TBARS處于最高水平，而E150V導致屠宰后各個時間點都處于較低的水平(P<0.01)。在腿肌中，G40％致暈導致屠宰后1天的TBARS有高于其它致暈處理的趨勢(P<0.10)，并且屠宰后6天的TBARS含量高于E65V(P<0.01)。在致暈處理組中，屠宰后45 min640％的胸肌SOD活性有高于E65V的趨勢(P=0.07)，

16、氣致暈兩個處理的GST活性均高于兩個電致暈組(P<0.01)。胸肌冷藏1天后G40％的SOD活性高于其它致暈組(P<0.01)，640％和E150V的GST活性高于E65V(P<0.01)。屠宰后1d G40％和G79％分別導致腿肌中的SOD和GST活性高于對照組。此外，G40％不僅抑制了胸肌和腿肌MAPK通路蛋白(ERK1/2，JNK1，JNK2，p38)的表達，而且抑制了胸肌中各種抗氧化基因(SOD1、SOD2、GSTA3、GSTK

17、1、GSTM2、GSTT1)的表達。與G40％相反，E65V不僅上調(diào)了胸肌和腿肌所有MAPK通路蛋白的表達，而且還上調(diào)了除SOD2之外的所有腿肌抗氧化基因的表達，表明G40％和E65V分別對該通路產(chǎn)生了抑制和激活刺激。G79％和E150V對K4PK通路和抗氧化基因表達的影響介于G40％和E150V之間。在致暈處理中，G40％和E65V都有維護儲存期內(nèi)肉色穩(wěn)定的效果。其中E65V通過升高血清尿酸水平、激活MAPK信號通路及該通路下游的SO

18、D和GST的基因表達，增強了抗氧化能力，緩解了肉品在儲存期間的脂質(zhì)過氧化。與此相反，G40％由于屠宰初期對上述基因的表達發(fā)生抑制，顯示適應(yīng)性較低，肉品在儲存期間受到更強的氧化損傷。
　　 試驗六旨在研究屠宰前不同階段在肉仔雞日糧中添加200 mg/kg DL-α-生育酚乙酸酯(VE)對高電流低頻率電致暈屠宰后的肉仔雞骨骼肌脂質(zhì)過氧化的影響，并通過對MAPK-Nrf2/EcH-ARE信號通路的研究，探討VE緩解致暈造成的氧化應(yīng)激的

19、作用機理。試驗分為4個處理，每個處理6個重復(fù)，每個重復(fù)10只雞。艾拔益加(從)肉仔雞在0～17日齡統(tǒng)一采食含正常VE濃度(20 mg/kgα-生育酚乙酸酯)的基礎(chǔ)日糧。在飼養(yǎng)后期(18～38日齡)配制飼喂基礎(chǔ)日糧VEb(無額外添加VE)和處理日糧VEc(添加200 mg/kgα-生育酚乙酸酯)。對照組在18～38日齡只采食VEb；VE1w組在18～31日齡采食VEb，在32～38日齡采食VEc；VE2w組在18～24日齡采食VEb，在2

20、5～38日齡采食VEc；VE3w組在18～38日齡一直采食VEc。飼養(yǎng)至38日齡時，每個重復(fù)取1只雞，用150V，130 mA致電致暈1秒。取胸大肌和髂腓肌測定各項肌肉的指標。結(jié)果表明，日糧中添加VE1～3周導致屠宰后45 min、2天、6天胸肌中TBARS和致屠宰后45 min、2、4、6天腿肌中TBARS含量降低(P<0.01)。屠宰后2天，腿肌中TBARS含量表現(xiàn)為不添加VE>添加VE3周>添加VE2周>添加VE1周(P<0.01

21、)。添加VE的所有處理組導致VE在胸肌和腿肌中的沉積量上升。在VE添加組中，VE在胸肌和腿肌中的沉積量多少的順序為添加3周<2周<1周(P<0.01)。與對照相比，添加VE1～2周下調(diào)了胸肌中MAPK-Nrf2/ECH-ARE通路中JNK1，JNK2和ECH(雞的Nrf2)的表達，添加3周上調(diào)了JNK1，JNK2和ECH的表達。與對照相比，添加1周下調(diào)了腿肌中JNK1，JKK2，p38和ECH的表達，與添加1周效果相反，添加2周上調(diào)了腿