一株雞源性腸炎沙門氏菌MLST分型及三型分泌系統(tǒng)基因分析.pdf

1、腸炎沙門氏菌是一種致病菌，該菌主要引起畜禽的胃腸炎以及人類腸炎和食物中毒。近年來，腸炎沙門氏菌已成為引起胃腸炎和食物中毒的主要病原菌之一，隨著由腸炎沙門氏菌引起的病例不斷上升，該菌不僅嚴(yán)重阻礙了養(yǎng)禽業(yè)的發(fā)展，而且還威脅著人畜健康，已經(jīng)成為公共衛(wèi)生所關(guān)注的問題。因此，深入了解該菌有利于更好地對(duì)該菌所引起的感染進(jìn)行防治。腸炎沙門氏菌的侵入動(dòng)物機(jī)體以及致病性與三型分泌系統(tǒng)密切相關(guān)，研究腸炎沙門氏菌的三型分泌系統(tǒng)有利于深入分析腸炎沙門氏菌的致病

2、性。
　　 本次試驗(yàn)對(duì)臨床分離的一株疑似腸炎沙門氏菌的臨床分離菌進(jìn)行鑒定，通過鑒定以確定其是否為一株腸炎沙門氏菌并確定其血清型。運(yùn)用多位點(diǎn)序列分型技術(shù)對(duì)該株腸炎沙門氏菌進(jìn)行分型，了解該株腸炎沙門氏菌的基因序列型。通過藥物敏感性試驗(yàn)分析腸炎沙門氏菌的耐藥性，從分子生物學(xué)角度分析其耐藥機(jī)理。分析腸炎沙門氏菌的三型分泌系統(tǒng)基因來了解其基因特點(diǎn)，并分析不同細(xì)菌三型分泌系統(tǒng)的基因序列差異。
　　 本次試驗(yàn)運(yùn)用培養(yǎng)特性、生化試驗(yàn)、血

3、清學(xué)試驗(yàn)、分子生物學(xué)試驗(yàn)對(duì)于該株細(xì)菌進(jìn)行鑒定，應(yīng)用多位點(diǎn)序列分型(MLST)對(duì)該株細(xì)菌進(jìn)行分型。MLST試驗(yàn)方法規(guī)定的7個(gè)管家基因分別為thrA、dnaN、hemD、hisD、purE、sucA、aroC，根據(jù)PubMLST(http://pubmlst.org)試驗(yàn)要求設(shè)計(jì)了7個(gè)管家基因的引物，分別擴(kuò)增測(cè)序。運(yùn)用K-B紙片法檢測(cè)該株細(xì)菌的耐藥性，根據(jù)耐藥性試驗(yàn)結(jié)果設(shè)計(jì)13對(duì)引物擴(kuò)增細(xì)菌基因組內(nèi)耐藥基因。血清學(xué)方法調(diào)查該株細(xì)菌在山東省蛋

4、雞群中流行情況。測(cè)序分析三型分泌系統(tǒng)的基因序列，從分子生物學(xué)角度進(jìn)行分析。
　　 該株臨床分離細(xì)菌培養(yǎng)特性方面符合沙門氏菌的培養(yǎng)特性，生化試驗(yàn)結(jié)果顯示該株沙門氏菌根據(jù)《伯杰氏手冊(cè)》關(guān)于腸炎沙門氏菌生化反應(yīng)特征的標(biāo)準(zhǔn)，該株細(xì)菌符合腸炎沙門氏菌的生化特征。16srRNA基因測(cè)序結(jié)果顯示該株細(xì)菌與雞腸炎沙門氏菌P125109同源性達(dá)100％。動(dòng)物回歸性試驗(yàn)結(jié)果顯示該株細(xì)菌致病性與腸炎沙門氏菌相同并且分離鑒定結(jié)果與腸炎沙門氏菌相符。血清

5、學(xué)試驗(yàn)結(jié)果確定其血清型為O3，19(+)；O9(+)；Hg，p(+)；Hg(+)；Hm(+)，多位點(diǎn)序列分型結(jié)果顯示該株細(xì)菌基因型為ST11。用自制的凝集抗原對(duì)采集自山東省泰安市、萊蕪市、濟(jì)寧市、濱州市、日照市、濰坊市、臨沂市的690份血樣進(jìn)行的檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果顯示陽性率2.2％，陰性率97.8％。藥敏結(jié)果顯示腸炎沙門氏菌耐受多種藥物。腸炎沙門氏菌耐藥基因擴(kuò)增中擴(kuò)增出ant(6)-iv基因、OXA-10基因、OXA-1基因、CTX-M-9

6、基因、TEM基因與預(yù)期目的片段大小一致。三型分泌系統(tǒng)試驗(yàn)結(jié)果顯示該株腸炎沙門氏菌的sipa基因、sipd基因沒有出現(xiàn)變異，但是三型分泌系統(tǒng)的sipa基因與sipd基因在比對(duì)過程中發(fā)現(xiàn)沙門氏菌親緣關(guān)系相近的這兩個(gè)基因同源性高。
　　 通過試驗(yàn)結(jié)果顯示該株細(xì)菌為腸炎沙門氏菌血清型為O3，19(+)；O9(+)；Hg，p(+)；Hg(+)；Hm(+)，基因型為ST11，該株細(xì)菌在全世界范圍內(nèi)皆有流行。該株型號(hào)為ST11的腸炎沙門氏菌在