茶樹離體再生體系與微型嫁接的研究.pdf

1、茶樹(Camellia sinensis)是世界上最重要的生產(chǎn)非酒精類飲料的木本植物之一。它生長周期長，自然結(jié)實率和雜交結(jié)實率都較低，使得常規(guī)茶樹育種需要2025年。植物組織培養(yǎng)技術(shù)是加快優(yōu)質(zhì)品種創(chuàng)新的重要手段，是現(xiàn)代生物技術(shù)應(yīng)用于遺傳育種研究的基礎(chǔ)。為建立快速、高效的茶樹離體再生體系，本研究分別以茶樹平陽特早[C.Sinensis cv.pingyangtezao] 7月下旬枝條和茶樹舒茶早[C.Sinensis cv．Shuchaz

2、ao]10月中旬的種子子葉為外植體，在離體培養(yǎng)條件下，首先建立了茶樹子葉離體再生體系，比較了其器官發(fā)生途徑和體細(xì)胞胚發(fā)生途徑；其次建立了茶樹腋芽離體快繁體系；第三采用微型嫁接的方式，解決了茶樹組培苗生根難，耗時長的問題，為茶樹組織培養(yǎng)與工業(yè)化生產(chǎn)的連接提供技術(shù)參考。主要結(jié)論如下：
　　 1．茶樹子葉離體再生的器官發(fā)生途徑不帶胚子葉愈傷組織的誘導(dǎo)率隨著2,4-D濃度的升高而增加，細(xì)胞分裂素配合生長素使用對愈傷組織的產(chǎn)生有增效作用。

3、在培養(yǎng)基MS+2.0mg·L-12,4D+0.5mg·L-1KT中，岀愈時間最短，岀愈率最高，達(dá)83.6％。轉(zhuǎn)到芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基 MS+2.0mg·L-16-BA+0.2mg·L-1NAA中繼代培養(yǎng)，帶胚子葉的出芽率、芽增殖倍數(shù)以及體細(xì)胞胚發(fā)生率分別為36.5％、12.3和38.2％，均高于不帶胚子葉。
　　 2．茶樹子葉離體再生的體細(xì)胞胚發(fā)生途徑在培養(yǎng)基MS+2.0mg·L-16-BA+0.2mg·L-1NAA+1.0mg·L-1

4、GA3中，帶胚子葉和不帶胚子葉可迅速脫分化產(chǎn)生胚性愈傷組織，進(jìn)而產(chǎn)生體細(xì)胞胚和次級體細(xì)胞胚，并萌發(fā)出芽。帶胚子葉的體細(xì)胞胚發(fā)生率為85.7％，體細(xì)胞胚萌發(fā)率79.4％，芽增殖倍數(shù)為17.0，均高于不帶胚子葉。
　　 3．茶樹腋芽離體快繁體系的建立以腋芽為外植體，在MS+2.0mg·L-16BA+0.2mg·L-1NAA培養(yǎng)基中腋芽迅速萌發(fā)，培養(yǎng)60d，成苗率可達(dá)82.3％。將得到的小苗按枝條、去頂芽和部分葉片的枝條、腋芽帶莖和部

5、分葉柄三種處理接種于1/2MS+1.0mg·L-16-BA+0.1mg·L-1NAA培養(yǎng)基中，腋芽帶莖和部分葉柄的處理萌發(fā)率和增殖倍數(shù)最高，分別達(dá)到71.4％和5.5；去頂芽和部分葉片的處理生長的最健壯；整個枝條的處理在部分莖段底端出現(xiàn)體細(xì)胞胚。
　　 4．胚性愈傷組織的繼代培養(yǎng)繼代培養(yǎng)中，體細(xì)胞胚的發(fā)生、萌發(fā)以及次級胚性愈傷組織的產(chǎn)生同時進(jìn)行。
　　 胚性愈傷組織的體細(xì)胞胚萌發(fā)率在M（MS不添加任何激素）培養(yǎng)基中最高，

6、為58.3％，在 P(MS+2.0mg·L-1 6-BA+0.2mg·L-1NAA+1.0mg·L-1GA3)中最低；而次級體細(xì)胞胚發(fā)生率以及體細(xì)胞胚增殖倍數(shù)在后者中最高。5．茶樹體細(xì)胞胚的發(fā)生茶樹體細(xì)胞胚在子葉柄處直接發(fā)生，或在子葉處產(chǎn)生胚性愈傷組織間接發(fā)生。帶胚子葉以直接和間接兩種方式產(chǎn)生體細(xì)胞胚，而不帶胚子葉只以間接方式產(chǎn)生。
　　 在體細(xì)胞胚間接發(fā)生途徑中，子葉表面隆起是發(fā)生脫分化的標(biāo)志，隨后細(xì)胞團(tuán)膨大、顏色變綠轉(zhuǎn)化成胚