枳兩個(gè)基因PtrMYB和PtrF3E1的抗逆功能分析.pdf

1、柑橘是我國重要的果樹之一，枳(Poncirus trifoliata)是柑橘生產(chǎn)中應(yīng)用最為廣泛的砧木，大部分柑橘品種不抗寒，枳抗寒但抗旱性較差，因此提高二者抗性對(duì)柑橘產(chǎn)業(yè)有著重要的意義。基因工程是提高植物抗性的有效途徑，其關(guān)鍵是克隆和鑒定重要的抗逆基因。本研究以本實(shí)驗(yàn)室已克隆的枳兩個(gè)基因PtrMYB和PtrF3E1(β-淀粉酶基因)為研究對(duì)象，分析了它們?cè)诓煌婢硹l件下的表達(dá)模式，通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)遺傳轉(zhuǎn)化將其轉(zhuǎn)入煙草(Nicotiana

2、nudicaulis)，對(duì)轉(zhuǎn)基因植株進(jìn)行鑒定，并分析它們對(duì)在高鹽、低溫或脫水脅迫的抗性，以鑒定其抗逆功能。取得的主要研究結(jié)果如下：
　　 1、實(shí)時(shí)定量PCR分析PtrMYB基因在脫水、高鹽、低溫不同脅迫和ABA處理下的表達(dá)，結(jié)果表明，該基因能被上述處理誘導(dǎo)，但其表達(dá)模式在不同處理下不同。亞細(xì)胞定位分析表明，PtrMYB定位于細(xì)胞核。
　　 通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)將PtrMYB轉(zhuǎn)化煙草，共鑒定出76株轉(zhuǎn)基因植株，在1#、7#、27

3、#、29#、39#和60#株系中超量表達(dá)。對(duì)27#和39#兩個(gè)株系及野生型植株(WT)進(jìn)行脫水處理，結(jié)果表明，兩個(gè)轉(zhuǎn)基因株系相對(duì)失水率和超氧陰離子含量均低于WT，在300 m mol/L鹽脅迫下，兩個(gè)轉(zhuǎn)基因株系的黃化程度低于WT，但葉綠素含量比WT高。RT-PCR分析表明，轉(zhuǎn)基因株系中多胺合成相關(guān)基因ADC，ODC和SPDS高于WT，并且與PtrMYB基因的表達(dá)量正相關(guān)。
　　 2、PtrF3E1表達(dá)水平能被脫水、高鹽、低溫所誘