肉仔雞對(duì)小肽的吸收轉(zhuǎn)運(yùn)及其調(diào)控研究.pdf

1、本課題研究了肉仔雞對(duì)小肽吸收的機(jī)理和日糧、激素和活性因子對(duì)小肽轉(zhuǎn)運(yùn)載體的調(diào)控作用，并比較研究了不同蛋白質(zhì)原料在肉仔雞消化道生成可吸收小肽的規(guī)律。 試驗(yàn)一：研究了溫度、酸度、培養(yǎng)液成分、樣品前處理等理化因素對(duì)Gly-Gly，Gly-L-Leu和Met-Gly的穩(wěn)定性的影響。將Gly-Gly，Gly-L-Leu和Met-Gly分別進(jìn)行含Ca2+、Mg2+的PBS培養(yǎng)液溶解、39.5℃恒溫培養(yǎng)30min、0.6mol/L高氯酸溶液稀釋

2、、含Ca2+、Mg2+的PBS培養(yǎng)液稀釋并煮沸5min、0.6mol/L高氯酸溶液稀釋并煮沸5min的處理。結(jié)果表明，上述處理后3種二肽的同收率均在97％以上。 試驗(yàn)二：研究了Gly-Gly和Gly-L-Leu在雞離體小腸各段的水解以及肽酶抑制劑抑制二肽水解的效果。將12只成年產(chǎn)蛋雞分為4組，每只為1個(gè)重復(fù)，取小腸分為十二指腸、空腸前段、空腸中段、空腸后段和回腸，制備外翻腸囊，分別在含有不同二肽(Gly-Gly，Gly-L-Le

3、u)與添加和不添加肽酶抑制劑(Bestatin和Amastatin)處理組成的4種培養(yǎng)液中培養(yǎng)。結(jié)果表明，雞離體外翻腸囊培養(yǎng)液中存在迅速而強(qiáng)烈的二肽水解現(xiàn)象，培養(yǎng)5min內(nèi)Gly-Gly全部被水解，而Gly-Leu也大部分被水解，25min后則被完全水解，其中以小腸前段的水解作用更為強(qiáng)烈。添加10μmol/LAmastatin和Bestatin未能抑制Gly-Gly的水解，但可有效抑制Gly-Leu的水解，培養(yǎng)25min后仍有40％的G

4、ly-Leu未被水解。 試驗(yàn)三：研究了日糧氮源形態(tài)對(duì)肉仔雞離體小腸Gly-Leu吸收轉(zhuǎn)運(yùn)及血清小分子肽含量的影響。選取預(yù)飼氨基酸、酪蛋白水解物和酪蛋白氮源的等能等氨基酸純合日糧3周的肉仔雞各9只，取十二指腸、空腸和回腸，制備外翻腸囊，分別在空白培養(yǎng)液、氨基酸培養(yǎng)液和Gly-Leu培養(yǎng)液中培養(yǎng)25min，測定黏膜液、漿膜液和組織勻漿液中的Gly-Leu含量。結(jié)果表明，日糧氮源形態(tài)顯著影響肉仔雞離體小腸對(duì)Gly-Leu的吸收，酪蛋白

5、組吸收Gly-Leu最多，酪蛋白水解物組吸收最少。離體小腸不同腸段吸收Gly-Leu的能力有顯著差異，十二指腸吸收能力顯著低于空腸和回腸。日糧氮源形態(tài)影響雞血清肽分子量分布，氨基酸組血清小分子肽比例顯著高于酪蛋白水解物和酪蛋白組。 試驗(yàn)四：研究了雞肽轉(zhuǎn)運(yùn)載體cPepTl基因表達(dá)的RT-PCR評(píng)定方法以及肉仔雞小腸mRNA的分布規(guī)律。根據(jù)雞肽轉(zhuǎn)運(yùn)載體cPepTlmRNA和看家基因β-actinmRNA序列，分別設(shè)計(jì)cPepT1和β

6、-actin引物各1對(duì)，并通過Mg2+濃度、循環(huán)數(shù)等PCR條件的優(yōu)化，建立了包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR的雞小腸cPepTl基因表達(dá)檢測方法。采用該方法研究了肉仔雞cPepTl基因在小腸各段的表達(dá)差異。結(jié)果顯示，肉仔雞小腸PepT1表達(dá)水平隨小腸近端到遠(yuǎn)端逐漸降低，回腸表達(dá)水平顯著低于十二指腸和空腸，十二指腸和空腸差異不顯著。 試驗(yàn)五：研究了外源激素和生長因子對(duì)肉仔雞PepTl基因表達(dá)的調(diào)控作用。25日齡肉仔雞30只隨機(jī)分為5

7、組，分別接受表皮生長因子、甲狀腺素、胰高血糖素、甲巰咪唑刺激，劑量分別為0.03mg，330μg，0.1mg，和25mg/kg體重，對(duì)照組注射蒸餾水，刺激為每日1次，連續(xù)5d，取小腸測定肽轉(zhuǎn)運(yùn)載體PepT1mRNA豐度。結(jié)果表明，甲狀腺素和胰高血糖素在轉(zhuǎn)錄水平顯著上調(diào)雞肽轉(zhuǎn)運(yùn)載體PepT1基因表達(dá)，而甲狀腺素抑制劑甲巰咪唑和表皮生長因子則有下調(diào)PepT1基因表達(dá)的趨勢。 試驗(yàn)六：比較研究了不同蛋白質(zhì)飼料在肉仔雞消化道內(nèi)水解釋放小

8、分子肽的特性。35只21日齡肉仔雞，分為7組，分別強(qiáng)飼70％待測飼料(豆粕、魚粉、菜籽粕、花生仁粕、玉米蛋白粉、血粉、棉籽粕)和30％淀粉的混合物50g，研究各種飼料在消化道水解釋放小分子肽(＜600Da)的特性。結(jié)果表明，同一蛋白質(zhì)飼料在肉仔雞消化道各部位水解釋放的小分子肽占水溶性蛋白質(zhì)的比例有顯著差異，其中腺胃釋放小分子肽比例顯著低于小腸各段，小腸中則以十二指腸最高，回腸后段最低，空腸前、后段和回腸前段之間無顯著差異。不同飼料蛋白在