綿羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白(JSRV-Env)對(duì)大鼠的致瘤性的研究.pdf

1、目的：為深入探討綿羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白(JSRV-Env)的致瘤性作用，以及對(duì)動(dòng)物機(jī)體各項(xiàng)生理指標(biāo)和相關(guān)基因的影響。
　　方法：將真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1-env用體內(nèi)轉(zhuǎn)染試劑經(jīng)尾靜脈轉(zhuǎn)染到幼齡大鼠體內(nèi)，在轉(zhuǎn)染21天后采用RT-PCR的方法及免疫組化法檢測(cè)真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1-env在大鼠體內(nèi)的表達(dá)；在轉(zhuǎn)染6個(gè)月內(nèi)對(duì)轉(zhuǎn)染大鼠進(jìn)行臨床指標(biāo)測(cè)定，每隔30d檢測(cè)外周血中淋巴細(xì)胞及其亞群的動(dòng)態(tài)變化以及淋巴細(xì)胞凋亡情況，同時(shí)進(jìn)行

2、血?dú)夥治龊湍[瘤標(biāo)志物的檢測(cè)；對(duì)大鼠肺臟組織K-ras基因、P53基因用SSCP的方法檢測(cè)基因突變情況；通過(guò)制作病理切片觀察組織學(xué)病理變化。
　　結(jié)果：轉(zhuǎn)染21d后真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1-env在大鼠肺臟組織存在表達(dá)。在轉(zhuǎn)染180d的期間內(nèi)，外周血中CD4+和CD8+T淋巴細(xì)胞水平在整個(gè)過(guò)程未呈現(xiàn)出顯著變化；凋亡細(xì)胞水平在整個(gè)過(guò)程中沒(méi)有發(fā)生明顯的凋亡程度變化；血?dú)夥治鼋Y(jié)果顯示pCO2、 pO2、 Hct、 BE(ecf)等十六

3、項(xiàng)指標(biāo)在不同時(shí)期與對(duì)照組比較，不存在顯著性差異。腫瘤標(biāo)志物癌胚抗原（CEA）和甲胎蛋白（AFP）檢測(cè)結(jié)果均在正常范圍內(nèi),轉(zhuǎn)染組與對(duì)照組比較沒(méi)有發(fā)生顯著變化。K-ras基因、P53基因沒(méi)有發(fā)生突變情況。病理組織學(xué)觀察沒(méi)有發(fā)現(xiàn)特征性病理學(xué)變化。
　　結(jié)論：本研究在大鼠體內(nèi)檢測(cè)到JSRV-env基因mRNA表達(dá)，同時(shí)可檢測(cè)到Env基因的蛋白表達(dá)，證明已經(jīng)成功的將JSRV–env基因轉(zhuǎn)染進(jìn)肺臟細(xì)胞胞漿內(nèi)，而JSRV的Env糖蛋白除了最初在

4、病毒侵入細(xì)胞過(guò)程中的作用外，它還具有類似病毒致癌蛋白的作用，能夠直接刺激細(xì)胞轉(zhuǎn)化，這為下一步的致瘤作用奠定了初步的基礎(chǔ)。本實(shí)驗(yàn)對(duì)轉(zhuǎn)染JSRV pcDNA3.1-env真核表達(dá)質(zhì)粒的大鼠分別進(jìn)行血?dú)夥治鰴z測(cè)，淋巴細(xì)胞亞群變化的檢測(cè)，淋巴細(xì)胞凋亡情況的檢測(cè)，腫瘤標(biāo)志物的檢測(cè)，相關(guān)基因突變的檢測(cè)以及組織病理學(xué)檢測(cè)，和對(duì)照組比較均未發(fā)現(xiàn)明顯的變化，證實(shí)綿羊肺腺瘤病毒囊膜基因(JSRV-env)對(duì)大鼠尚未產(chǎn)生致瘤性作用。其主要原因可能是綿羊肺腺瘤