馬鈴薯內生菌的分離純化及其對馬鈴薯生長發(fā)育的影響.pdf

1、植物內生菌(Endophyticfungi)作為一類特殊生境的微生物資源，廣泛分布于苔蘚植物、蕨類植物、裸子植物以及被子植物類群中，經過與宿主植物的長期協(xié)同進化，它們能夠產生與宿主植物結構相同或相似的化學物質，并且影響著植物的生長發(fā)育。本文以馬鈴薯LK99(SolanumtuberosumL.cv.LK99)組培苗為材料，對馬鈴薯LK99組培苗內生菌及其對馬鈴薯LK99組培苗生長發(fā)育的影響進行了初步研究，取得了以下結果：
　　

2、1.取生長15天馬鈴薯LK99組培苗，剪成長度約1.0cm的帶腋芽莖段，接種于馬鈴薯蔗糖瓊脂培養(yǎng)基(PSA)和MS培養(yǎng)基上，于光下(2200Lx、16hr光/8hr黑暗、28℃)和28℃暗培養(yǎng)。3天后，光下或黑暗條件下生長在PSA培養(yǎng)基上的組培苗周圍均出現了黃色的菌塊，而光下或黑暗條件下生長在MS培養(yǎng)基上的組培苗周圍均無菌塊的出現。經單菌落分離、內生菌的生理生化試驗及16SrDNA片段的擴增和序列分析得知：光下生長于PSA培養(yǎng)基上的組培

3、苗周圍出現的菌斑分離到2種細菌，分屬于Bacillussp.和Bacillussubtilis，命名為Bacillussp，LW01和BacillussubtilisLS01。黑暗條件下生長于PSA培養(yǎng)基上的組培苗周圍出現的菌斑分離到2種細菌，分屬于Leifsoniasp.和Bacillussp.，命名為Leifsoniasp.DH01和Bacillussp.DW01。
　　 2.取生長15天馬鈴薯LK99組培苗，剪成長度約1.

4、0cm的帶腋芽莖段，接種于MS培養(yǎng)基上，于光下(2200Lx、16hr光/8hr黑暗、28℃)培養(yǎng)5周左右，加入25mL液體MS培養(yǎng)基于組培瓶，黑暗22℃培養(yǎng)5周左右以結薯。選取直徑為1.5cm的微型薯，一切為二，將切面置于馬鈴薯蔗糖瓊脂培養(yǎng)基(PSA)或MS培養(yǎng)基表面，于光下(2200Lx、16hr光/8hr黑暗、28℃)或28℃暗培養(yǎng)。3天后，光下或黑暗條件下生長在PSA培養(yǎng)基上的微型薯周圍均出現了黃色的菌塊，而光下或黑暗條件下生長

5、在MS培養(yǎng)基上的微型薯周圍均無菌塊出現。經單菌落分離、內生菌的生理生化實驗分析及16SrDNA片段的擴增和序列分析得知：光下生長于PSA培養(yǎng)基上的微型薯周圍出現的菌塊分離到2種細菌，分屬于Bacillussubtilis和Bacillussp.，命名為BacillussubtilisSLH01和Bacillussp.SLB01。黑暗條件下生長于PSA培養(yǎng)基上的組培苗周圍出現的菌塊分離到1種細菌，屬于Bacillussp.，命名為Baci

6、llussp.SDB01。
　　 3.培養(yǎng)分離得到的7種內生菌，待內生菌OD600長至0.5時，將組培苗莖段在菌液中浸沒，立刻取出轉入含MS培養(yǎng)基的組培瓶子28℃、2200Lx、16hr光/8hr黑暗條件下培養(yǎng)。DH01菌株和LW01菌株在MS培養(yǎng)基上沒有菌落長出。在第3周時，DH01菌株和LW01菌株對組培苗株高的抑制最明顯。DH01菌株處理的組培苗，在光下培養(yǎng)5周后的組培苗表現出主根很短、粗壯且無側根形成，根色為黑褐色。對照

7、組組培苗的根細長茂盛，略帶綠色，側根發(fā)達。DH01菌株處理組整株平均鮮重比對照組降低了1.45％，單株平均地上部分鮮重比對照組增加了15.63%，根平均鮮重比對照組降低了40.48%。整株平均干重、單株平均地上部分干重比對照組分別增加了6.93%、241.30%，根平均干重比對照組降低了471.43%。以上數據表明，DH01菌株對根有明顯的抑制作用，但是對地上部生物量的積累有明顯的促進作用。LW01菌株浸染組培苗，經5周在光下培養(yǎng)，組培

8、苗的根細長，略帶綠色，側根發(fā)達，與對照組組培苗的根沒有明顯的區(qū)別，整株平均鮮重比對照組降低了13.9%，單株平均地上部分鮮重比對照組降低了17.9%，根平均鮮重比對照組降低了3.1%。整株平均干重、單株平均地上部分干重比對照組分別增加了8，7%、8.8%，根平均干重比對照組增加了8.8%，以上數據表明，LW01菌株對生物量的積累起到促進作用，但對鮮重的積累起到抑制作用。DW01菌株和LS01菌株在其OD600低至0.18時浸染組培苗，均

9、可在1～2天內在馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基上大量生長，最終導致組培苗死亡。
　　 SLH01菌株處理組培苗，在光下培養(yǎng)5周后，其SLH01處理組單株平均地上部分鮮重比對照組增加了33.63%，單株平均根鮮重比對照組降低了73.78%，單株平均地上部分干重比對照組增加了50.85%，單株平均根干重比對照組降低了29.75%。SDB01處理組培苗，在光下培養(yǎng)5周后，其SDB01處理組單株平均地上部分鮮重比對照組增加了103.84%，單株平均根

10、鮮重比對照組降低了69.80%，單株平均地上部分干重比對照組增加了106.76%，單株平均根干重比對照組降低了62.75%。SLH01菌株和SDB01菌株浸染組培苗，在光下培養(yǎng)5周后的組培苗表現出主根很短、粗壯且無側根形成，根色為黑褐色，且浸染部位膨大，對照組組培苗的根細長茂盛，略帶綠色，側根發(fā)達。結果表明，SLH01菌株和SDB01菌株對生物量的積累都有促進作用，但對根的發(fā)育有明顯的抑制作用，SLB01菌株在其OD600低至0.18時