馬鈴薯內(nèi)生菌的分離純化及其對(duì)馬鈴薯生長(zhǎng)發(fā)育的影響.pdf

1、植物內(nèi)生菌(Endophyticfungi)作為一類特殊生境的微生物資源，廣泛分布于苔蘚植物、蕨類植物、裸子植物以及被子植物類群中，經(jīng)過與宿主植物的長(zhǎng)期協(xié)同進(jìn)化，它們能夠產(chǎn)生與宿主植物結(jié)構(gòu)相同或相似的化學(xué)物質(zhì)，并且影響著植物的生長(zhǎng)發(fā)育。本文以馬鈴薯LK99(SolanumtuberosumL.cv.LK99)組培苗為材料，對(duì)馬鈴薯LK99組培苗內(nèi)生菌及其對(duì)馬鈴薯LK99組培苗生長(zhǎng)發(fā)育的影響進(jìn)行了初步研究，取得了以下結(jié)果：
　　

2、1.取生長(zhǎng)15天馬鈴薯LK99組培苗，剪成長(zhǎng)度約1.0cm的帶腋芽莖段，接種于馬鈴薯蔗糖瓊脂培養(yǎng)基(PSA)和MS培養(yǎng)基上，于光下(2200Lx、16hr光/8hr黑暗、28℃)和28℃暗培養(yǎng)。3天后，光下或黑暗條件下生長(zhǎng)在PSA培養(yǎng)基上的組培苗周圍均出現(xiàn)了黃色的菌塊，而光下或黑暗條件下生長(zhǎng)在MS培養(yǎng)基上的組培苗周圍均無菌塊的出現(xiàn)。經(jīng)單菌落分離、內(nèi)生菌的生理生化試驗(yàn)及16SrDNA片段的擴(kuò)增和序列分析得知：光下生長(zhǎng)于PSA培養(yǎng)基上的組培

3、苗周圍出現(xiàn)的菌斑分離到2種細(xì)菌，分屬于Bacillussp.和Bacillussubtilis，命名為Bacillussp，LW01和BacillussubtilisLS01。黑暗條件下生長(zhǎng)于PSA培養(yǎng)基上的組培苗周圍出現(xiàn)的菌斑分離到2種細(xì)菌，分屬于Leifsoniasp.和Bacillussp.，命名為L(zhǎng)eifsoniasp.DH01和Bacillussp.DW01。
　　 2.取生長(zhǎng)15天馬鈴薯LK99組培苗，剪成長(zhǎng)度約1.

4、0cm的帶腋芽莖段，接種于MS培養(yǎng)基上，于光下(2200Lx、16hr光/8hr黑暗、28℃)培養(yǎng)5周左右，加入25mL液體MS培養(yǎng)基于組培瓶，黑暗22℃培養(yǎng)5周左右以結(jié)薯。選取直徑為1.5cm的微型薯，一切為二，將切面置于馬鈴薯蔗糖瓊脂培養(yǎng)基(PSA)或MS培養(yǎng)基表面，于光下(2200Lx、16hr光/8hr黑暗、28℃)或28℃暗培養(yǎng)。3天后，光下或黑暗條件下生長(zhǎng)在PSA培養(yǎng)基上的微型薯周圍均出現(xiàn)了黃色的菌塊，而光下或黑暗條件下生長(zhǎng)

5、在MS培養(yǎng)基上的微型薯周圍均無菌塊出現(xiàn)。經(jīng)單菌落分離、內(nèi)生菌的生理生化實(shí)驗(yàn)分析及16SrDNA片段的擴(kuò)增和序列分析得知：光下生長(zhǎng)于PSA培養(yǎng)基上的微型薯周圍出現(xiàn)的菌塊分離到2種細(xì)菌，分屬于Bacillussubtilis和Bacillussp.，命名為BacillussubtilisSLH01和Bacillussp.SLB01。黑暗條件下生長(zhǎng)于PSA培養(yǎng)基上的組培苗周圍出現(xiàn)的菌塊分離到1種細(xì)菌，屬于Bacillussp.，命名為Baci

6、llussp.SDB01。
　　 3.培養(yǎng)分離得到的7種內(nèi)生菌，待內(nèi)生菌OD600長(zhǎng)至0.5時(shí)，將組培苗莖段在菌液中浸沒，立刻取出轉(zhuǎn)入含MS培養(yǎng)基的組培瓶子28℃、2200Lx、16hr光/8hr黑暗條件下培養(yǎng)。DH01菌株和LW01菌株在MS培養(yǎng)基上沒有菌落長(zhǎng)出。在第3周時(shí)，DH01菌株和LW01菌株對(duì)組培苗株高的抑制最明顯。DH01菌株處理的組培苗，在光下培養(yǎng)5周后的組培苗表現(xiàn)出主根很短、粗壯且無側(cè)根形成，根色為黑褐色。對(duì)照

7、組組培苗的根細(xì)長(zhǎng)茂盛，略帶綠色，側(cè)根發(fā)達(dá)。DH01菌株處理組整株平均鮮重比對(duì)照組降低了1.45％，單株平均地上部分鮮重比對(duì)照組增加了15.63%，根平均鮮重比對(duì)照組降低了40.48%。整株平均干重、單株平均地上部分干重比對(duì)照組分別增加了6.93%、241.30%，根平均干重比對(duì)照組降低了471.43%。以上數(shù)據(jù)表明，DH01菌株對(duì)根有明顯的抑制作用，但是對(duì)地上部生物量的積累有明顯的促進(jìn)作用。LW01菌株浸染組培苗，經(jīng)5周在光下培養(yǎng)，組培

8、苗的根細(xì)長(zhǎng)，略帶綠色，側(cè)根發(fā)達(dá)，與對(duì)照組組培苗的根沒有明顯的區(qū)別，整株平均鮮重比對(duì)照組降低了13.9%，單株平均地上部分鮮重比對(duì)照組降低了17.9%，根平均鮮重比對(duì)照組降低了3.1%。整株平均干重、單株平均地上部分干重比對(duì)照組分別增加了8，7%、8.8%，根平均干重比對(duì)照組增加了8.8%，以上數(shù)據(jù)表明，LW01菌株對(duì)生物量的積累起到促進(jìn)作用，但對(duì)鮮重的積累起到抑制作用。DW01菌株和LS01菌株在其OD600低至0.18時(shí)浸染組培苗，均

9、可在1～2天內(nèi)在馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基上大量生長(zhǎng)，最終導(dǎo)致組培苗死亡。
　　 SLH01菌株處理組培苗，在光下培養(yǎng)5周后，其SLH01處理組單株平均地上部分鮮重比對(duì)照組增加了33.63%，單株平均根鮮重比對(duì)照組降低了73.78%，單株平均地上部分干重比對(duì)照組增加了50.85%，單株平均根干重比對(duì)照組降低了29.75%。SDB01處理組培苗，在光下培養(yǎng)5周后，其SDB01處理組單株平均地上部分鮮重比對(duì)照組增加了103.84%，單株平均根

10、鮮重比對(duì)照組降低了69.80%，單株平均地上部分干重比對(duì)照組增加了106.76%，單株平均根干重比對(duì)照組降低了62.75%。SLH01菌株和SDB01菌株浸染組培苗，在光下培養(yǎng)5周后的組培苗表現(xiàn)出主根很短、粗壯且無側(cè)根形成，根色為黑褐色，且浸染部位膨大，對(duì)照組組培苗的根細(xì)長(zhǎng)茂盛，略帶綠色，側(cè)根發(fā)達(dá)。結(jié)果表明，SLH01菌株和SDB01菌株對(duì)生物量的積累都有促進(jìn)作用，但對(duì)根的發(fā)育有明顯的抑制作用，SLB01菌株在其OD600低至0.18時(shí)