辣椒多聚半乳糖醛酸酶可逆性抑制蛋白(PGIP)基因轉(zhuǎn)化小麥、玉米及抗性評(píng)價(jià).pdf_第1頁(yè)
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1、多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白(polygalacturonaseinhibitingprotein，PGIP)是一種特異性蛋白，能夠非競(jìng)爭(zhēng)性地抑制病原菌的內(nèi)切多聚半乳糖醛酸酶(endopolygalacturonase，endo-PG)活性，增強(qiáng)植物的抗病性。研究發(fā)現(xiàn)多種植物體內(nèi)含有PGIP基因，這類基因承受了較小的進(jìn)化壓力，進(jìn)化速率較快，致使有些植物如禾谷類作物的PGIP基因已經(jīng)丟失，而多數(shù)茄科類作物留了這類基因。本研究主要是將PGIP基

2、因轉(zhuǎn)入到禾本科作物小麥和玉米基因組中，以期獲得轉(zhuǎn)PGIP基因的小麥玉米植株，從而能對(duì)真菌病害如小麥赤霉病、玉米紋枯、玉米大小斑病等產(chǎn)生抗性。本研究的主要結(jié)果和結(jié)論如下：
　　 1、植物表達(dá)載體pCBUPGIP構(gòu)建
　　 將克隆出的PGIP基因和含有Bar基因的pCAMBIA-Bar-Ubi載體雙酶切后用T4連接酶連接構(gòu)建植物表達(dá)載體pCBUPGIP，并用PCR鑒定。成功構(gòu)建載體后轉(zhuǎn)入大腸桿菌進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)提取質(zhì)粒，純化后，

3、測(cè)定濃度并稀釋至1.0ug/L用于基因槍法轉(zhuǎn)化小麥；同時(shí)采用液氮凍融法將載體轉(zhuǎn)入根癌農(nóng)桿菌LBA4404，轉(zhuǎn)化玉米。
　　 2、轉(zhuǎn)基因小麥玉米種質(zhì)材料的獲得
　　 通過優(yōu)化小麥玉米再生體系，建立了高效再生體系，并成功獲得小麥品種揚(yáng)麥158的轉(zhuǎn)化再生株、玉米自交系A(chǔ)188和齊319的轉(zhuǎn)化再生株。提取轉(zhuǎn)化株的總DNA，用PGIP兩端的引物擴(kuò)增DNA樣品，均得到了660bp的目的片段。
　　 3、轉(zhuǎn)化株進(jìn)行真菌病害抗病

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