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文檔簡介
1、黑脛病病原菌感染油菜時，病原菌會分泌一系列的聚半乳糖醛酸酶(PGs)來降解植物的天然屏障——細胞壁，并誘導油菜產(chǎn)生一系列抗性基因來防御黑脛病病原菌。其中特異性蛋白聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白(PGIPs)能非競爭性的抑制病原菌的內切多聚半乳糖醛酸酶(endo-PGs)的活性，來抵御病原真菌的侵染，抑制病害的發(fā)生，從而增強植物的抗病性。所以PGIP是一個有效的抗真菌病害的蛋白，值得用于植物的抗病育種。但植物中直接分離純化該蛋白有產(chǎn)率低、工藝復雜
2、等弊端，因此希望通過本研究克隆出pgip基因，構建出能夠產(chǎn)生PGIP蛋白的工程菌株。本文克隆2個甘藍型油菜的聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白(PGIPs)相關基因，轉入畢赤酵母中誘導表達，并檢測黑脛病病原菌誘導甘藍型油菜產(chǎn)生的PGIP蛋白對病原菌分泌的PG是否有抑制作用，為提高油菜黑脛病的抗性具有重大意義。主要研究內容如下:
1、接種黑脛病病原菌NM-1孢子懸浮液于甘藍型油菜—青雜5號子葉葉片，提取病斑周圍葉片總RNA，擴增獲得pgip
3、9和pgip15的CDS編碼序列，構建克隆載體pMD-19-T-pgip9/15。
2、構建真核表達載體pPICZαA-pgip9/15，轉入Pichia pastoris PAMD16宿主細胞中構建工程菌株。SDS-PAGE及Western blot檢測，在36～37KDa處出現(xiàn)單一的融合蛋白條帶。
3、工程菌株誘導表達后，上清液中PGIP9和PGIP15蛋白含量分別為12.356μg/μL和11.976μg/μL
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