布魯氏菌實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)方法與血清快速診斷試紙的初步研究.pdf_第1頁(yè)
已閱讀1頁(yè),還剩63頁(yè)未讀 繼續(xù)免費(fèi)閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡(jiǎn)介

1、布魯氏菌?。˙rucellosis,簡(jiǎn)稱布?。┦怯刹剪斒暇鸬囊环N人獸共患傳染病。危害人畜健康并給畜牧業(yè)發(fā)展造成巨大損失。該病在世界范圍內(nèi)廣泛流行,我國(guó)也是布病的高發(fā)國(guó)家,新疆、青海、西藏、內(nèi)蒙古等地區(qū)尤為嚴(yán)重,有效的檢疫是預(yù)防和控制布魯氏菌病的重要手段,傳統(tǒng)檢測(cè)方法存在易發(fā)生交叉反應(yīng)、操作繁瑣、敏感性低等缺點(diǎn),研究敏感、特異、快速、適合臨床應(yīng)用的檢測(cè)方法已引起了國(guó)內(nèi)外的高度重視,本實(shí)驗(yàn)建立的布魯氏菌實(shí)時(shí)熒光定量PCR與血清快速診斷試

2、紙檢測(cè)方法,將會(huì)為基層布病檢疫和防控提供技術(shù)支持。本實(shí)驗(yàn)所做的工作及主要成果如下:
   1.布魯氏菌BP26蛋白的表達(dá)、純化。將bp26基因克隆到pGM-T載體,進(jìn)行酶切、PCR及測(cè)序鑒定后,構(gòu)建重組質(zhì)粒pET-28a-BP26,轉(zhuǎn)化表達(dá)菌并誘導(dǎo)表達(dá)、純化,Western-blot分析其免疫原性。結(jié)果表明正確構(gòu)建了pGM-T-BP26,成功表達(dá)了BP26融合蛋白,SDS-PAGE檢測(cè)表明獲得了高表達(dá)量、高純度的蛋白,并且布魯氏

3、菌陽(yáng)性血清能特異性與BP26蛋白相結(jié)合,表明具有免疫原性,為后續(xù)的免疫學(xué)檢測(cè)試驗(yàn)奠定了基礎(chǔ)。
   2.建立基于布魯氏菌BP26蛋白的血清快速檢測(cè)膠體金免疫層析試紙條。以膠體金標(biāo)SPA和布魯氏菌BP26蛋白制備免疫層析試紙條,并對(duì)其特異性、敏感性、準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果試紙條檢測(cè)布魯氏菌陽(yáng)性血清為兩條線,檢測(cè)其他細(xì)菌抗血清只有質(zhì)控線顯色,5-10min可觀察結(jié)果,具有良好的特異性;采用該方法、琥紅平板、試管凝集分別檢測(cè)45

4、份布魯氏菌M5免疫的小鼠血清,陽(yáng)性率分別為95.6%(43/45)、86.7%(39/45)和93.3%(42/45),試紙條與琥紅平板的符合率為90.6%,與試管凝集的符合率為97.9%,試紙條可檢出1:100倍稀釋的羊陽(yáng)性血清;1:128倍稀釋的小鼠陽(yáng)性血清,表明具有較好的敏感性;本試紙條在4℃可保存6個(gè)月,表明該檢測(cè)方法具有較高的穩(wěn)定性。
   3.利用二重實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)建立鑒別診斷布魯氏菌和結(jié)核桿菌的方法。篩選布

5、魯氏菌omp10、omp19、omp17、omp25、omp31和結(jié)核桿菌cfp10基因的最佳引物組合,建立二重實(shí)時(shí)定量PCR鑒別診斷方法,對(duì)該方法進(jìn)行穩(wěn)定性、特異性和敏感性試驗(yàn),并對(duì)臨床樣品及模擬樣品進(jìn)行檢測(cè)。經(jīng)篩選布魯氏菌的omp25基因與結(jié)核桿菌cfp10基因引物組合最佳,該二重實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法中布魯氏菌Tm值為88℃-89℃,結(jié)核桿菌Tm值為90℃-92℃,對(duì)其他供試的菌株則為陰性;該方法對(duì)布魯氏菌的DNA最低檢出量為20

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫(kù)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評(píng)論

0/150

提交評(píng)論