FSH通過Skp2、p27kip1調(diào)節(jié)仔豬睪丸支持細(xì)胞的增殖.pdf

1、睪丸支持細(xì)胞(Sertoli cell，SC)是影響精子生成的最重要的因素，SC與生精細(xì)胞數(shù)量比例保持恒定是生精細(xì)胞分化的一個(gè)重要條件，SC的數(shù)量決定了成年動(dòng)物睪丸產(chǎn)生精子的數(shù)量。SC的增殖受多種因素的調(diào)節(jié)，在所有影響的激素和因子中，F(xiàn)SH是調(diào)節(jié)SC增殖過程最重要的激素之一，而Skp2是調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖的關(guān)鍵性因子，能與發(fā)生泛素化的p27kip1。結(jié)合，促使p27kip1在26S的蛋白酶體上發(fā)生降解，促進(jìn)細(xì)胞進(jìn)程。
　　 本研究擬以

2、2～3周齡的仔豬為研究對(duì)象，以FSH調(diào)節(jié)Skp2的表達(dá)為核心，以培養(yǎng)的仔豬睪丸支持細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)材料，通過添加各種信號(hào)通路的抑制劑，運(yùn)用Western blot檢測(cè)Skp2、p27kip1蛋白的表達(dá)，運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)Skp2 mRNA的表達(dá)，為進(jìn)一步認(rèn)識(shí)促卵泡素調(diào)節(jié)睪丸支持細(xì)胞增殖的分子機(jī)制奠定基礎(chǔ)。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：
　　 (1)FSH促進(jìn)了Skp2蛋白的表達(dá)，30min時(shí)，蛋白的量最大，此后Skp2的表達(dá)有

3、所下降，到90min時(shí)，Skp2蛋白的表達(dá)量與對(duì)照相比無明顯差異。同時(shí)FSH也促進(jìn)了Skp2 mRNA的表達(dá)，加入FSH15min后，Skp2 mRNA的表達(dá)明顯增加，與對(duì)照組相比增加了11.56倍(P<0.05)，在30min時(shí)，Skp2 mRNA表達(dá)量最高，是對(duì)照組的17.76倍(P<0.05)，此后其表達(dá)水平有所下降。
　　 (2)加入cAMP的促進(jìn)劑Forskolin(10uM)與FSH一樣均明顯促進(jìn)了Skp2蛋白的表達(dá)

4、，抑制了p27kip1蛋白的降解；而cAMP的抑制劑Rp-cAMP(20 uM)單獨(dú)作用時(shí)對(duì)Skp2、p27kip1蛋白的表達(dá)無明顯影響，但抑制了FSH對(duì)Skp2、p27kip1蛋白的作用。
　　 (3)Ca2+通道抑制劑(Verapamil)(0.05mg/ml)單獨(dú)作用時(shí)對(duì)Skp2、p27kip1蛋白的表達(dá)無明顯影響，但抑制了FSH對(duì)Skp2、p27kip1蛋白的作用。FSH單獨(dú)作用時(shí)細(xì)胞中Skp2 mRNA表達(dá)水平與對(duì)照組

5、相比增加了7.14倍，加入Verapamil后細(xì)胞內(nèi)Skp2mRNA的水平有所下降，僅為FSH單獨(dú)作用時(shí)的67.45％(P<0.05)。Verapamil單獨(dú)作用時(shí)對(duì)于Skp2 mRNA的表達(dá)與對(duì)照組相比差異不顯著(P>0.05)。
　　 (4)ERK的抑制劑U0126單獨(dú)作用時(shí)對(duì)Skp2、p27kip1蛋白的表達(dá)無明顯影響，但抑制了FSH對(duì)Skp2、p27kip1蛋白的作用。U0126對(duì)Skp2 mRNA的表達(dá)也無明顯影響(P

6、>0.05)，但當(dāng)U0126與FSH共同作用時(shí)Skp2 mRNA的表達(dá)明顯下降，與FSH單獨(dú)作用相比降低了53.0％(P(0.05)。
　　 綜上所述，本實(shí)驗(yàn)可以得到如下結(jié)論：
　　 (1)FSH(50ng/ml)以時(shí)間依賴的方式促進(jìn)了Skp2的表達(dá)，這一作用在30min時(shí)達(dá)到最佳效果；
　　 (2)FSH通過cAMP的產(chǎn)生和促進(jìn)Ca2+的內(nèi)流激活ERK1/2級(jí)聯(lián)，并通過ERK1/2級(jí)聯(lián)誘導(dǎo)Skp2 mRNA和蛋