馬鈴薯懸浮細胞系的建立及小G蛋白AtRop1,StRac1的亞細胞定位.pdf

1、植物細胞懸浮培養(yǎng)是一種在受到不斷攪動或搖動的液體培養(yǎng)基里培養(yǎng)單細胞及小細胞團的培養(yǎng)系統，是植物生物技術中最有用的研究手段之一。小G蛋白是一類單體GTP結合蛋白，具有GTPase活性，植物細胞內的小G蛋白家族統稱為 ROPs（Rho-related GTPase from plant），大量的研究結果已經證明ROP-GTP酶在植物防衛(wèi)反應體系的建成過程中具有十分重要的調控作用。本研究主要利用馬鈴薯品種底西瑞建立適于遺傳轉化的馬鈴薯懸浮細胞

2、體系，將擬南芥 AtRop1及馬鈴薯 StRac1的野生型，激活型和非激活型分別與綠色熒光蛋白（GFP）融合，用農桿菌介導的瞬時轉化和PEG（聚乙二醇）介導的脂質轉化方法，轉化煙草葉片和馬鈴薯懸浮細胞，利用熒光顯微鏡觀察GFP的位置進而確定小G蛋白的亞細胞定位。研究結果表明：
　　1.馬鈴薯品種底西瑞（Desiree）懸浮細胞生長呈典型的S型，生長周期為2周左右。添加2 mg/L2,4-D及1mg/L NAA的MS培養(yǎng)基最適合底西

3、瑞懸浮細胞的生長。細胞的最佳接種量為7.5mL/50mL。
　　2.利用農桿菌瞬時表達的方法，將擬南芥中的小G蛋白AtRop1定位在煙草葉片表皮細胞的細胞膜上，激活型的AtCA-Rop1和失活型的AtDN-Rop1分別定位在細胞膜和細胞質中；馬鈴薯小G蛋白StRac1和其激活型的StCA-Rac1定位在煙草葉片表皮細胞的細胞膜上，而失活型的StDN-Rac1主要表達在細胞質和細胞核中。
　　3.利用PEG法轉化馬鈴薯懸浮細胞