家蠶類濃核病毒的細(xì)胞病理學(xué)研究及家蠶胚胎細(xì)胞系SWAU1-BmE的建立.pdf

1、家蠶濃核病毒(中國株)引起的家蠶濃核病是中國蠶業(yè)生產(chǎn)上的重要病害,嚴(yán)重影響蠶絲的產(chǎn)量和質(zhì)量,削弱了國際競爭力.家蠶類濃核病毒(DNV-like)是一株從西南農(nóng)業(yè)大學(xué)家蠶基因庫分離到的家蠶類濃核病毒.該論文對(duì)其病原性和病理學(xué)進(jìn)行了研究,并對(duì)它的分子生物學(xué)特性進(jìn)行了初步研究.1.病原性研究:用不同濃度梯度的DNV-like和BmDNV-2,分別對(duì)不同品種的家蠶攻毒,逐日統(tǒng)計(jì)累計(jì)死亡率.2.病理學(xué)研究:常規(guī)HE染色和組織熒光原性雜交顯示,家蠶

2、感染該病毒以后,首先寄生在家蠶中腸的圓筒形細(xì)胞,并表現(xiàn)為核的極度膨大并破裂,最大核為正常核的3倍以上;熒光原位雜交結(jié)果表明,該病毒在圓筒形細(xì)胞核內(nèi)增殖,隨著感染加深,鄰近的杯形細(xì)胞也會(huì)受到感染.3.病毒DNA的研究:對(duì)DNV-!ike抽提的DNA進(jìn)行電泳,發(fā)現(xiàn)只有一條大約6.5kb的帶.明顯不同于BmDNV-2的兩條帶(6.6kb和6.1kb),也大于BmDNV-!的一條帶(5.0kb).綜合以上因素,可以初步認(rèn)為該病毒是一種新型家蠶濃

3、核病毒,但要對(duì)它準(zhǔn)確分類,還需要很多數(shù)據(jù),故暫命名為DNV-like.為了進(jìn)一步研究DNV-!ike以及其它家蠶病毒的致病機(jī)理,建立高效的病毒離體復(fù)制系統(tǒng),更為了向細(xì)胞工程研究提供理想的材料,該研究還嘗試建立高繁殖力、對(duì)病毒敏感的家蠶細(xì)胞系.對(duì)多個(gè)品種家蠶的中晚期胚胎使用胰酶半消化法建立原代初級(jí)培養(yǎng),在長達(dá)11個(gè)月的分化、淘汰及篩選過程中,先后出現(xiàn)了多種組織,其中以網(wǎng)狀組織、管狀組織、脂肪體組織以及根瘤狀組織為主.其中以雜交種的活力最大

4、,組織更替快,生長也比較快.最后從雜交種得到的根瘤狀組織中獲得了高繁殖力的細(xì)胞群體,這時(shí)細(xì)胞種類復(fù)雜,繁殖力也不穩(wěn)定.經(jīng)過3個(gè)月的繼續(xù)篩選,獲得了繁殖力穩(wěn)定、細(xì)胞形態(tài)比較均一的細(xì)胞系.命名為西農(nóng)蠶胚1號(hào)細(xì)胞系,英文名Southwest Agncultural University Bombyx mori.L 1,簡寫為SWAU1-Bm E.該細(xì)胞系以梭形和近圓形細(xì)胞為主,雜以少量多突起和巨型細(xì)胞.細(xì)胞系的倍增時(shí)間在28℃時(shí)為57.6小時(shí)