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文檔簡(jiǎn)介
1、臨床常見(jiàn)標(biāo)本的細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)常見(jiàn)臨床標(biāo)本1、血液2、尿液3、糞便4、4、膿汁5、痰6、穿刺液(胸水、腹水、心包液、關(guān)節(jié)液、腦脊液)7、膽汁8、咽拭子標(biāo)本采集的基本原則盡早采集病程早期、急性期、癥狀典型時(shí)、抗生素治療前無(wú)菌采集標(biāo)本容器須滅菌處理,但不得使用消毒劑選擇合適方法采集適量采集腸熱癥患者,病程第1周采集血液、第2周糞便、第3周尿液安全采集注意防止污染、避免自身感染標(biāo)本的運(yùn)送采樣后立即送檢,一般不超過(guò)1h痰、尿標(biāo)本應(yīng)保存在4℃;腦脊液、
2、滑膜液應(yīng)25℃保存檢驗(yàn)的基本程序初次分離選用的培養(yǎng)基類(lèi)別血液、骨髓先增菌后接種血、巧、中胸腹水先增菌后接種血、巧、中腦脊液先增菌后接種血、巧、中膽汁先增菌后接種血、中尿液接種血、中糞便接種SS、中痰、咽拭子接種血、巧、中膿、傷口分泌物接種血、巧、中白喉棒狀桿菌接種血、胱氨酸亞碲酸鉀血瓊脂淋病奈瑟菌接種血、MTM真菌沙保羅瓊脂檢驗(yàn)的報(bào)告方式初步報(bào)告方式涂片染色、直接鏡檢從染色性、基本形態(tài)、排列方式幾方面報(bào)告陽(yáng)性結(jié)果:檢出XX性XX菌,形似
3、XX菌找到XX性XX菌找到真菌菌絲和孢子陰性結(jié)果:未找到或未檢出細(xì)菌未查到抗酸桿菌未發(fā)現(xiàn)真菌菌絲或孢子檢驗(yàn)的報(bào)告方式確定報(bào)告方式經(jīng)分離培養(yǎng)、生化反應(yīng)及血清學(xué)試驗(yàn)后報(bào)告陽(yáng)性結(jié)果:培養(yǎng)出XX細(xì)菌有XX細(xì)菌生長(zhǎng)檢出XX群XX菌培養(yǎng)XX天有XX菌生長(zhǎng)陰性結(jié)果:未培養(yǎng)出細(xì)菌未檢出細(xì)菌培養(yǎng)XX天無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)第一節(jié)、血液標(biāo)本的細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)血液標(biāo)本的細(xì)菌培養(yǎng)是診斷菌血癥或敗血癥的基本方法。如從患者血液中檢出細(xì)菌,一般應(yīng)視為病原菌。常見(jiàn)的病原菌主要有:1、革
4、蘭陽(yáng)性菌:金黃色葡萄球菌、A群鏈球菌、B群鏈球菌、肺炎鏈球菌、腸球菌草綠色鏈球菌產(chǎn)單核細(xì)胞李斯特菌、結(jié)核分枝桿菌2、革蘭陰性菌腦膜炎奈瑟菌、卡他莫拉菌傷寒及副傷寒沙門(mén)菌、銅綠假單胞菌、流感嗜血桿菌3、其他病原菌:念珠菌、新型隱球菌血培養(yǎng)最佳的采血時(shí)機(jī)?最佳采血時(shí)機(jī)一般于病人發(fā)熱12天內(nèi)采集血液標(biāo)本。盡可能在未使用抗菌藥物前采集。對(duì)已經(jīng)使用抗菌藥物的患者,則在下一次使用抗菌藥物之前采集。盡可能在寒戰(zhàn)或發(fā)熱前0.5~1h內(nèi)采集。血培養(yǎng)瓶的消
5、毒取下頂部保護(hù)性的彈性帽蓋。注意:內(nèi)部的橡皮塞并非無(wú)菌的,必須進(jìn)行消毒。75%酒精消毒血培養(yǎng)瓶橡皮塞子60s。將標(biāo)本注入培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)。采血套數(shù)及采血量應(yīng)在不同部位采集2~3套血培養(yǎng)。應(yīng)在10min內(nèi)完成采血。成人每瓶血培養(yǎng)應(yīng)采8~10ml。兒童每瓶采3~5ml。新生兒0.5ml。嬰幼兒1~2ml,采血量不能超過(guò)全血量的1%。增菌培養(yǎng)液與血液的比例為10:1。嬰幼兒不需常規(guī)做厭氧菌血培養(yǎng)。感染性心內(nèi)膜炎對(duì)血培養(yǎng)檢測(cè)的特殊要求血培養(yǎng)套數(shù):建議起
6、始采集3套血培養(yǎng),如果24h內(nèi)報(bào)告陰性,則繼續(xù)采集2套血培養(yǎng),共采集5套血培養(yǎng)。解釋?zhuān)翰杉嗵籽囵B(yǎng),其一,可以幫助判斷陽(yáng)性血培養(yǎng)是真性菌血癥,還是由污染菌引起,因?yàn)橛晌廴揪鸬耐诙嗵籽囵B(yǎng)中僅有一套報(bào)陽(yáng)性;其二,多套血培養(yǎng)可以提供更充足的采血量,而血量是影響血中微生物檢出的非常重要的因素;其三,多套血培養(yǎng)可幫助判斷是否為持續(xù)性菌血癥。如病人已實(shí)施治療,應(yīng)在增菌培養(yǎng)液中加入相應(yīng)拮抗劑:磺胺類(lèi)藥物→對(duì)氨基苯甲酸5mg100ml.青霉
7、素→2u青霉素酶ml氨基糖苷類(lèi)、多粘菌素類(lèi)→聚回香腦磺酸鈉其他抗生素→MgSO45mg100ml血標(biāo)本采集的注意事項(xiàng)應(yīng)從靜脈采血,不建議采集動(dòng)脈血。血培養(yǎng)不宜從靜脈導(dǎo)管或靜脈留置裝置取血。血培養(yǎng)瓶常溫保存,不應(yīng)冷藏;采集血標(biāo)本后請(qǐng)立即送到檢驗(yàn)科進(jìn)行檢測(cè),如果是夜班采集標(biāo)本,可以放室溫保存(不要冷藏或者放到孵箱內(nèi),第二天交班請(qǐng)立即送到檢驗(yàn)科。血液標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)方法和操作流程3.報(bào)告方式培養(yǎng)7d無(wú)菌生長(zhǎng)者報(bào)告“培養(yǎng)7d無(wú)菌生長(zhǎng)”。查見(jiàn)細(xì)菌報(bào)
8、告菌名和藥敏結(jié)果。2.培養(yǎng)瓶中有細(xì)菌生長(zhǎng)時(shí)的不同表現(xiàn)。第二節(jié)腦脊液標(biāo)本腦脊液的細(xì)菌學(xué)檢查對(duì)于細(xì)菌性腦膜炎的診斷有重要價(jià)值。正常人的腦脊液是無(wú)菌的,檢出細(xì)菌提示有細(xì)菌性(急性化膿性、結(jié)核性等)腦膜炎。標(biāo)本中常見(jiàn)的病原菌一、革蘭陽(yáng)性菌金葡菌A群(化膿性)鏈球菌B群(無(wú)乳)鏈球菌新生兒肺炎鏈球菌成人結(jié)核分枝桿菌產(chǎn)單核細(xì)胞李斯特菌二、革蘭陰性菌腦膜炎奈瑟菌成人流感嗜血桿菌兒童三、真菌新型隱球菌白色念珠菌(一)標(biāo)本的采集由臨床醫(yī)師以無(wú)菌操作腰椎穿
9、刺(圖5一3),抽取腦脊液3一5ml盛于無(wú)菌容器中立即送檢,一般不能超過(guò)1h。腦膜炎奈瑟菌離體后能產(chǎn)生自溶素、迅速自溶肺炎鏈球菌及流感嗜血桿菌也易死亡。因此腦脊液無(wú)論涂片或培養(yǎng)、必須于采集后立即送檢或床旁接種,不宜將其置于冰箱保存、否則影響檢出率。第一管作微生物學(xué)檢驗(yàn)、第二管生化和免疫學(xué)檢驗(yàn)、第三管腦脊液常規(guī)。腦脊液標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)方法和操作流程圖(1)一般細(xì)菌涂片檢查:化膿性腦膜炎腦脊液大部分明顯混濁,可直接涂片,無(wú)色、透明的腦脊液30
10、00rmin離心1015min后涂片,革蘭染色后鏡檢。根據(jù)染色及形態(tài)特征常可初步提示細(xì)菌的種類(lèi)例如,革蘭陰性、凹面相對(duì)的球菌,可能是腦膜炎奈瑟菌;鏈狀排列的革蘭陽(yáng)性球菌,可能是鏈球菌;長(zhǎng)絲狀等多形態(tài)性的革蘭陰性桿菌,可能是流感嗜血桿菌。⑵結(jié)核分枝桿菌涂片檢查:取腦脊液的離心(3000rmin30min)沉淀物作抗酸染色,發(fā)現(xiàn)紅色桿菌,報(bào)告“找到抗酸桿菌”。如有纖維團(tuán),直接取纖維團(tuán)涂片。鏡檢必須非常仔細(xì),因?yàn)橥谝粡埐F现荒苷业?一2
11、個(gè)結(jié)核菌。(3)新型隱球菌涂片檢查取腦脊液的離心沉淀物作墨汁負(fù)染色,加蓋片后高倍鏡檢,黑色背景中見(jiàn)有菌體和較寬的莢膜,可能為“新型隱球菌”。1、涂片檢查(二)檢驗(yàn)方法和操作流程(二)檢驗(yàn)方法和操作流程2.分離培養(yǎng)標(biāo)本離心后接種血平板、巧克力平板,510%CO235℃培養(yǎng)1824h,進(jìn)一步鑒定。血平板CO2環(huán)境培養(yǎng),易于識(shí)別β溶血鏈球菌和肺炎鏈球菌巧克力平板CO2環(huán)境培養(yǎng),有利于檢出肺炎鏈球菌、腦膜炎奈瑟菌、流感嗜血桿菌。3.報(bào)告方式培養(yǎng)
12、48小時(shí),仍無(wú)菌生長(zhǎng)者報(bào)告“培養(yǎng)2天無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)”。查見(jiàn)細(xì)菌報(bào)告細(xì)菌,報(bào)告菌名和藥敏結(jié)果。第三節(jié)痰標(biāo)本下呼吸道的痰液是無(wú)細(xì)菌的,而經(jīng)口腔咳出的痰帶有多種上呼吸道的正常寄生菌(如草綠色鏈球菌)。若從患者痰標(biāo)本中查見(jiàn)致病菌或條件致病菌,提示有下呼吸道感染。常見(jiàn)的病原菌主要有:(1)革蘭陽(yáng)性菌肺炎鏈球菌、A群鏈球菌、金黃色葡萄球菌結(jié)核分枝桿菌、白喉棒狀桿菌(2)革蘭陰性菌卡他布蘭漢菌、腦膜炎奈瑟菌流感嗜血桿菌、腸桿菌科細(xì)菌銅綠假單胞菌、嗜肺軍團(tuán)
13、菌(2)其他病原菌放線菌、奴卡菌、真菌、肺炎支原體(一)痰標(biāo)本的采集標(biāo)本采集方法(1)自然咳痰法(2)支氣管鏡采集法(3)氣管穿刺法(4)結(jié)核分枝桿菌標(biāo)本收集法:收集24h痰液以提高陽(yáng)性檢出率。呼吸系統(tǒng)標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)方法和操作流程(二)檢驗(yàn)方法和操作流程1.肉眼觀察包括顏色、粘度、有無(wú)血絲或膿。2.涂片檢查其一、確定標(biāo)本是否適合作培養(yǎng),在低倍鏡下觀察白細(xì)胞和上皮細(xì)胞的數(shù)目多少來(lái)評(píng)定(如表);其二、初步判定是否有病原菌存在。痰標(biāo)本鏡下分類(lèi)
14、注:A、B兩種情況的痰標(biāo)本適合做培養(yǎng),C不合適,應(yīng)重新留標(biāo)本(1)一般細(xì)菌涂片挑取膿性或血性痰液制成薄而均勻的涂片,革蘭染色后鏡檢。(2)結(jié)核分枝桿菌涂片①挑取膿性或血性痰液制成薄而均勻的涂片,作抗酸染色鏡檢。②濃集法菌檢根據(jù)所見(jiàn)結(jié)果報(bào)告“找到(或未查到)抗酸桿菌”。(3)放線菌及諾卡菌涂片將痰液用生理鹽水洗滌數(shù)次,挑取黃色顆?;虿煌该鞯闹唿c(diǎn),置載玻片上、覆以蓋玻片、輕輕擠壓,置高倍鏡下觀察其結(jié)構(gòu)、如見(jiàn)中央為交織的菌絲,末端呈放線狀
15、排列,然后揭去蓋玻片。干燥后作革蘭和抗酸染色鏡檢。如查見(jiàn)中間菌絲部分為革蘭陽(yáng)性,四周放射菌絲為革蘭陰性,而抗酸染色陰性,可報(bào)告為“找到染色、形態(tài)疑似放線菌”如查見(jiàn)革蘭染色結(jié)果與放線菌相同,而抗酸染色弱陽(yáng)性者,可報(bào)告為“找到染色、形態(tài)疑似奴卡菌”肉眼觀察未見(jiàn)黃色顆粒,革蘭染色與抗酸染色均為陰性,報(bào)告為陰性。結(jié)核分枝桿菌奴卡菌3.培養(yǎng)(1)培養(yǎng)標(biāo)本的選擇:應(yīng)選擇粘液膿痰作涂片,排除不合格的標(biāo)本。(2)痰標(biāo)本培養(yǎng)前處理:用無(wú)菌生理鹽水將痰洗滌
16、3次,加入等量的1%胰酶溶液(PH7.6),35C水浴90min,使痰液均質(zhì)化后備用。(3)分離培養(yǎng)處理后痰液接種于血瓊脂平板、巧克力瓊脂平板和麥康凱(或EMB,中國(guó)藍(lán))瓊脂平板,置5%10%二氧化碳環(huán)境中,35℃培養(yǎng)1824h根據(jù)菌落及形態(tài)特點(diǎn),作出初步判斷然后按各類(lèi)細(xì)菌特征進(jìn)行生化鑒定,并同時(shí)作藥物敏感測(cè)定。4.報(bào)告方式痰標(biāo)本培養(yǎng)48小時(shí)后僅有草綠色鏈球菌生長(zhǎng)而無(wú)致病菌生長(zhǎng),報(bào)告“正常菌群”。查出致病菌,報(bào)告菌名和藥敏結(jié)果,同時(shí)報(bào)告
17、細(xì)菌的量化指標(biāo)(表53),如“少量、中等或多量”。表53痰標(biāo)本在平板上的菌落量化指標(biāo)第四節(jié)尿標(biāo)本中段尿培養(yǎng)加計(jì)數(shù)對(duì)于泌尿道感染的診斷有重要價(jià)值。細(xì)菌培養(yǎng)必須結(jié)合菌落計(jì)數(shù)辨別是否為病原菌。正常人中段尿細(xì)菌數(shù)≤103cfuml(一)尿液標(biāo)本的采集1.中段尿采集法最常用2.直接導(dǎo)尿采集法易造成逆行感染,盡量不用3.留置導(dǎo)尿管收集尿液法注意不能從尿液收集袋中采集標(biāo)本4.膀胱穿刺法(二)尿液標(biāo)本中常見(jiàn)的病原菌細(xì)菌中80%為革蘭陰性桿菌,20%為革
18、蘭陽(yáng)性菌(三)檢驗(yàn)方法和操作流程【涂片檢查】取離心沉淀物涂片(1)一般細(xì)菌革蘭染色、鏡檢、報(bào)告(2)淋病奈瑟菌革蘭染色、鏡檢,如發(fā)現(xiàn)腎形雙球菌,可報(bào)告“檢出革蘭陰性雙球菌,位于細(xì)胞內(nèi)(或外),形似淋病奈瑟菌”(3)念珠菌革蘭染色、鏡檢,如發(fā)現(xiàn)芽生孢子和假菌絲,且革蘭染色陽(yáng)性時(shí),可報(bào)告“檢出念珠菌”。(4)結(jié)核分枝桿菌抗酸染色、鏡檢,如在藍(lán)色背景中查見(jiàn)紅色桿菌,報(bào)告“找到抗酸桿菌”。尿液標(biāo)本細(xì)菌檢驗(yàn)方法和操作流程(三)檢驗(yàn)方法和操作流程【
19、細(xì)菌培養(yǎng)】1.一般細(xì)菌培養(yǎng)如培養(yǎng)2d無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng),即可棄去。尿培養(yǎng)的步驟:(1)收集中段尿(2)用10μl標(biāo)準(zhǔn)接種環(huán)取尿液接種血平板(連續(xù)劃線)和中國(guó)藍(lán)平板(分區(qū)劃線)(3)35℃培養(yǎng)24h(4)菌落計(jì)數(shù)計(jì)數(shù)血平板上生長(zhǎng)菌落,乘以稀釋倍數(shù)(100)得出cfuml。若整個(gè)平板菌落多得無(wú)法計(jì)數(shù),可報(bào)告“菌落數(shù)105ml”。(5)若≤2種菌生長(zhǎng)對(duì)每種菌進(jìn)行鑒定和藥敏;若>2種菌生長(zhǎng)報(bào)告“混合菌群”。2.特殊細(xì)菌培養(yǎng)(1)淋病奈瑟菌培養(yǎng)(2)厭氧
20、菌培養(yǎng)(3)結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)3.報(bào)告方式培養(yǎng)48h無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng),報(bào)告“2天無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)”。查見(jiàn)細(xì)菌,報(bào)告菌名及其菌落計(jì)數(shù)(菌落數(shù)ml)和藥敏結(jié)果。第五節(jié)糞便標(biāo)本正常情況下腸道中有多種細(xì)菌。引起感染性腹瀉的病原微生物有:(1)細(xì)菌性:產(chǎn)毒素型腹瀉、侵襲型腹瀉、食物中毒、慢性腹瀉。(2)真菌性(3)病毒性糞便標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)方法和操作流程(一)標(biāo)本采集1.自然排便法挑取黏液膿血或夾雜假膜部分的糞便2.直腸拭子法直腸拭子標(biāo)本先增菌26h后轉(zhuǎn)種。糞便
21、標(biāo)本直接轉(zhuǎn)種SS、中國(guó)藍(lán)等選擇培養(yǎng)基。培養(yǎng)基選用原則上是一強(qiáng)一弱搭配。(二)檢驗(yàn)方法和操作流程1.涂片檢查糞便標(biāo)本因各種正常菌群含量甚多,僅以染色性和形態(tài)無(wú)法分辯是否為病原菌。因此,糞便標(biāo)本一般不作涂片檢查。2.培養(yǎng)判斷糞便培養(yǎng)出的細(xì)菌是否為致病菌,看其是否分解乳糖:致病菌一般不分解乳糖(SS平板上生長(zhǎng)無(wú)色菌落);條件致病菌除變形桿菌外,均能分解乳糖(SS平板上生長(zhǎng)紅色菌落)(1)沙門(mén)志賀菌培養(yǎng):①糞便接種于SS平板和中國(guó)藍(lán)平板;②挑選
22、SS平板上不發(fā)酵乳糖菌落,分別接種于三糖鐵瓊脂(KIA)和動(dòng)力吲哚尿素培養(yǎng)基;③生化反應(yīng),AF多價(jià)“O”血清或因子血清進(jìn)行鑒定。(2)致病性大腸埃希菌培養(yǎng)(3)霍亂弧菌培養(yǎng)(4)副溶血弧菌培養(yǎng)(5)小腸結(jié)腸炎耶爾森菌培養(yǎng)(6)空腸彎曲菌培養(yǎng)(7)葡萄球菌培養(yǎng)(8)艱難梭菌培養(yǎng)(9)真菌培養(yǎng)3.報(bào)告方式報(bào)告菌種名稱(chēng)藥敏試驗(yàn)結(jié)果第六節(jié)膿液及病灶分泌物標(biāo)本化膿性感染可由單種或多種細(xì)菌引起。常見(jiàn)病原菌主要有革蘭陽(yáng)性菌:金黃色葡萄球菌、化膿性鏈球
23、菌、炭疽芽胞桿菌、破傷風(fēng)梭菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌、結(jié)核分枝桿菌革蘭陰性菌:大腸埃希菌、變形桿菌、銅綠假單胞菌、腐敗謝瓦菌,以及梭桿菌和擬桿菌等。其他病原菌:諾卡菌、放線菌、念珠菌膿液和創(chuàng)面分泌物標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢查方法和操作流程(一)標(biāo)本采集1.開(kāi)放性膿液先以無(wú)菌生理鹽水沖洗潰瘍表面,再用2支滅菌棉拭取潰瘍底部或邊緣的分泌物,插入斯氏(Stuart)運(yùn)送培養(yǎng)基內(nèi)送檢。一支為涂片檢查用,一支作培養(yǎng)用。2.封閉性膿腫消毒局部皮膚或粘膜表面后、用無(wú)菌注射
24、器穿刺抽取,將膿液注入無(wú)菌試管內(nèi)送檢。疑為厭氧菌感染時(shí),應(yīng)作床邊接種或置厭氧運(yùn)送培養(yǎng)基內(nèi)送檢。3.大面積燒傷的創(chuàng)面分泌物用滅菌棉拭子取多部位創(chuàng)面的膿液或分泌物。置滅菌試管內(nèi)送檢。4.放線菌標(biāo)本可以用抽吸和拭子,對(duì)于瘺管可將無(wú)菌紗布置于其內(nèi)數(shù)小時(shí)后取出檢驗(yàn)。(二)檢驗(yàn)方法和操作流程1.涂片檢查膿液及分泌物涂片作革蘭染色境檢,根據(jù)形態(tài)和染色特點(diǎn),可報(bào)告“查見(jiàn)革蘭X性菌,形似XX菌”或報(bào)告“末查見(jiàn)細(xì)菌”。泌尿、生殖道標(biāo)本中發(fā)現(xiàn)革蘭陰性細(xì)菌,應(yīng)
25、注意尋找是否有細(xì)胞內(nèi)雙球菌(形似淋病奈瑟菌)。對(duì)疑有結(jié)核分枝桿菌的標(biāo)本,加做抗酸染色;對(duì)疑為棒狀桿菌的標(biāo)本,加做異染顆粒染色。閉鎖性膿腫的穿刺液標(biāo)本含厭氧菌的可能性大。膿汁標(biāo)本肉眼觀察,如發(fā)現(xiàn)1mm以下的灰白色或硫磺色顆粒,應(yīng)挑出至玻片上,以壓片法檢測(cè)是否為放線菌,繼之用革蘭染色和抗酸染色鏡檢,確定放線菌種類(lèi),并發(fā)出報(bào)告:找到XX放線菌。2.培養(yǎng)(1)普通菌培養(yǎng)標(biāo)本接種血瓊脂平板和中國(guó)藍(lán)瓊脂平板,35℃培養(yǎng)18一24h后,根據(jù)菌落特性和
26、形態(tài)染色,作出初步判斷再按各類(lèi)細(xì)菌的生物學(xué)特性進(jìn)行鑒定。(2)厭氧菌培養(yǎng)取膿液標(biāo)本接種厭氧血瓊脂平板及其他厭氧選擇平板,置于厭氧環(huán)境培養(yǎng),根據(jù)生長(zhǎng)情況及涂片染色結(jié)果,按厭氧菌生物學(xué)特性進(jìn)行鑒定。(3)嗜血桿菌及奈瑟菌培養(yǎng)接種于巧克力瓊脂平板置二氧化碳環(huán)境中培養(yǎng)。(4)結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)一般將膿液約0.1ml直接接種到結(jié)核菌培養(yǎng)基,組織或臟器應(yīng)先迸行粉碎然后進(jìn)行培養(yǎng)。(5)真菌培養(yǎng)一般可用沙氏培養(yǎng)基。3.報(bào)告方式查見(jiàn)致病菌,報(bào)告菌名和藥敏結(jié)
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