臨床標本的細菌學(xué)檢驗ppt課件

1、臨床常見標本的細菌學(xué)檢驗常見臨床標本1、血液2、尿液3、糞便4、4、膿汁5、痰6、穿刺液（胸水、腹水、心包液、關(guān)節(jié)液、腦脊液）7、膽汁8、咽拭子標本采集的基本原則盡早采集病程早期、急性期、癥狀典型時、抗生素治療前無菌采集標本容器須滅菌處理，但不得使用消毒劑選擇合適方法采集適量采集腸熱癥患者，病程第1周采集血液、第2周糞便、第3周尿液安全采集注意防止污染、避免自身感染標本的運送采樣后立即送檢，一般不超過1h痰、尿標本應(yīng)保存在4℃；腦脊液、

2、滑膜液應(yīng)25℃保存檢驗的基本程序初次分離選用的培養(yǎng)基類別血液、骨髓先增菌后接種血、巧、中胸腹水先增菌后接種血、巧、中腦脊液先增菌后接種血、巧、中膽汁先增菌后接種血、中尿液接種血、中糞便接種SS、中痰、咽拭子接種血、巧、中膿、傷口分泌物接種血、巧、中白喉棒狀桿菌接種血、胱氨酸亞碲酸鉀血瓊脂淋病奈瑟菌接種血、MTM真菌沙保羅瓊脂檢驗的報告方式初步報告方式涂片染色、直接鏡檢從染色性、基本形態(tài)、排列方式幾方面報告陽性結(jié)果：檢出XX性XX菌，形似

3、XX菌找到XX性XX菌找到真菌菌絲和孢子陰性結(jié)果：未找到或未檢出細菌未查到抗酸桿菌未發(fā)現(xiàn)真菌菌絲或孢子檢驗的報告方式確定報告方式經(jīng)分離培養(yǎng)、生化反應(yīng)及血清學(xué)試驗后報告陽性結(jié)果：培養(yǎng)出XX細菌有XX細菌生長檢出XX群XX菌培養(yǎng)XX天有XX菌生長陰性結(jié)果：未培養(yǎng)出細菌未檢出細菌培養(yǎng)XX天無細菌生長第一節(jié)、血液標本的細菌學(xué)檢驗血液標本的細菌培養(yǎng)是診斷菌血癥或敗血癥的基本方法。如從患者血液中檢出細菌，一般應(yīng)視為病原菌。常見的病原菌主要有：1、革

4、蘭陽性菌：金黃色葡萄球菌、A群鏈球菌、B群鏈球菌、肺炎鏈球菌、腸球菌草綠色鏈球菌產(chǎn)單核細胞李斯特菌、結(jié)核分枝桿菌2、革蘭陰性菌腦膜炎奈瑟菌、卡他莫拉菌傷寒及副傷寒沙門菌、銅綠假單胞菌、流感嗜血桿菌3、其他病原菌：念珠菌、新型隱球菌血培養(yǎng)最佳的采血時機？最佳采血時機一般于病人發(fā)熱12天內(nèi)采集血液標本。盡可能在未使用抗菌藥物前采集。對已經(jīng)使用抗菌藥物的患者，則在下一次使用抗菌藥物之前采集。盡可能在寒戰(zhàn)或發(fā)熱前0.5～1h內(nèi)采集。血培養(yǎng)瓶的消

5、毒取下頂部保護性的彈性帽蓋。注意：內(nèi)部的橡皮塞并非無菌的，必須進行消毒。75%酒精消毒血培養(yǎng)瓶橡皮塞子60s。將標本注入培養(yǎng)瓶內(nèi)。采血套數(shù)及采血量應(yīng)在不同部位采集2～3套血培養(yǎng)。應(yīng)在10min內(nèi)完成采血。成人每瓶血培養(yǎng)應(yīng)采8～10ml。兒童每瓶采3～5ml。新生兒0.5ml。嬰幼兒1～2ml，采血量不能超過全血量的1%。增菌培養(yǎng)液與血液的比例為10：1。嬰幼兒不需常規(guī)做厭氧菌血培養(yǎng)。感染性心內(nèi)膜炎對血培養(yǎng)檢測的特殊要求血培養(yǎng)套數(shù)：建議起

6、始采集3套血培養(yǎng)，如果24h內(nèi)報告陰性，則繼續(xù)采集2套血培養(yǎng)，共采集5套血培養(yǎng)。解釋：采集多套血培養(yǎng)，其一，可以幫助判斷陽性血培養(yǎng)是真性菌血癥，還是由污染菌引起，因為由污染菌引起的往往在多套血培養(yǎng)中僅有一套報陽性；其二，多套血培養(yǎng)可以提供更充足的采血量，而血量是影響血中微生物檢出的非常重要的因素；其三，多套血培養(yǎng)可幫助判斷是否為持續(xù)性菌血癥。如病人已實施治療，應(yīng)在增菌培養(yǎng)液中加入相應(yīng)拮抗劑：磺胺類藥物→對氨基苯甲酸5mg100ml.青霉

7、素→2u青霉素酶ml氨基糖苷類、多粘菌素類→聚回香腦磺酸鈉其他抗生素→MgSO45mg100ml血標本采集的注意事項應(yīng)從靜脈采血，不建議采集動脈血。血培養(yǎng)不宜從靜脈導(dǎo)管或靜脈留置裝置取血。血培養(yǎng)瓶常溫保存，不應(yīng)冷藏；采集血標本后請立即送到檢驗科進行檢測，如果是夜班采集標本，可以放室溫保存（不要冷藏或者放到孵箱內(nèi)，第二天交班請立即送到檢驗科。血液標本細菌學(xué)檢驗方法和操作流程3.報告方式培養(yǎng)7d無菌生長者報告“培養(yǎng)7d無菌生長”。查見細菌報

8、告菌名和藥敏結(jié)果。2.培養(yǎng)瓶中有細菌生長時的不同表現(xiàn)。第二節(jié)腦脊液標本腦脊液的細菌學(xué)檢查對于細菌性腦膜炎的診斷有重要價值。正常人的腦脊液是無菌的，檢出細菌提示有細菌性（急性化膿性、結(jié)核性等）腦膜炎。標本中常見的病原菌一、革蘭陽性菌金葡菌A群（化膿性）鏈球菌B群（無乳）鏈球菌新生兒肺炎鏈球菌成人結(jié)核分枝桿菌產(chǎn)單核細胞李斯特菌二、革蘭陰性菌腦膜炎奈瑟菌成人流感嗜血桿菌兒童三、真菌新型隱球菌白色念珠菌（一）標本的采集由臨床醫(yī)師以無菌操作腰椎穿

9、刺(圖5一3)，抽取腦脊液3一5ml盛于無菌容器中立即送檢，一般不能超過1h。腦膜炎奈瑟菌離體后能產(chǎn)生自溶素、迅速自溶肺炎鏈球菌及流感嗜血桿菌也易死亡。因此腦脊液無論涂片或培養(yǎng)、必須于采集后立即送檢或床旁接種，不宜將其置于冰箱保存、否則影響檢出率。第一管作微生物學(xué)檢驗、第二管生化和免疫學(xué)檢驗、第三管腦脊液常規(guī)。腦脊液標本細菌學(xué)檢驗方法和操作流程圖(1)一般細菌涂片檢查:化膿性腦膜炎腦脊液大部分明顯混濁，可直接涂片，無色、透明的腦脊液30

10、00rmin離心1015min后涂片，革蘭染色后鏡檢。根據(jù)染色及形態(tài)特征?？沙醪教崾炯毦姆N類例如，革蘭陰性、凹面相對的球菌，可能是腦膜炎奈瑟菌；鏈狀排列的革蘭陽性球菌，可能是鏈球菌；長絲狀等多形態(tài)性的革蘭陰性桿菌，可能是流感嗜血桿菌。⑵結(jié)核分枝桿菌涂片檢查:取腦脊液的離心(3000rmin30min)沉淀物作抗酸染色，發(fā)現(xiàn)紅色桿菌，報告“找到抗酸桿菌”。如有纖維團，直接取纖維團涂片。鏡檢必須非常仔細，因為往往在一張玻片上只能找到1一2

11、個結(jié)核菌。(3)新型隱球菌涂片檢查取腦脊液的離心沉淀物作墨汁負染色，加蓋片后高倍鏡檢，黑色背景中見有菌體和較寬的莢膜，可能為“新型隱球菌”。1、涂片檢查（二）檢驗方法和操作流程（二）檢驗方法和操作流程2.分離培養(yǎng)標本離心后接種血平板、巧克力平板，510％CO235℃培養(yǎng)1824h，進一步鑒定。血平板CO2環(huán)境培養(yǎng)，易于識別β溶血鏈球菌和肺炎鏈球菌巧克力平板CO2環(huán)境培養(yǎng)，有利于檢出肺炎鏈球菌、腦膜炎奈瑟菌、流感嗜血桿菌。3.報告方式培養(yǎng)

12、48小時，仍無菌生長者報告“培養(yǎng)2天無細菌生長”。查見細菌報告細菌，報告菌名和藥敏結(jié)果。第三節(jié)痰標本下呼吸道的痰液是無細菌的，而經(jīng)口腔咳出的痰帶有多種上呼吸道的正常寄生菌（如草綠色鏈球菌）。若從患者痰標本中查見致病菌或條件致病菌，提示有下呼吸道感染。常見的病原菌主要有：（1）革蘭陽性菌肺炎鏈球菌、A群鏈球菌、金黃色葡萄球菌結(jié)核分枝桿菌、白喉棒狀桿菌（2）革蘭陰性菌卡他布蘭漢菌、腦膜炎奈瑟菌流感嗜血桿菌、腸桿菌科細菌銅綠假單胞菌、嗜肺軍團

13、菌（2）其他病原菌放線菌、奴卡菌、真菌、肺炎支原體（一）痰標本的采集標本采集方法(1)自然咳痰法(2)支氣管鏡采集法(3)氣管穿刺法(4)結(jié)核分枝桿菌標本收集法：收集24h痰液以提高陽性檢出率。呼吸系統(tǒng)標本細菌學(xué)檢驗方法和操作流程（二）檢驗方法和操作流程1.肉眼觀察包括顏色、粘度、有無血絲或膿。2.涂片檢查其一、確定標本是否適合作培養(yǎng)，在低倍鏡下觀察白細胞和上皮細胞的數(shù)目多少來評定(如表)；其二、初步判定是否有病原菌存在。痰標本鏡下分類

14、注：A、B兩種情況的痰標本適合做培養(yǎng)，C不合適，應(yīng)重新留標本（1）一般細菌涂片挑取膿性或血性痰液制成薄而均勻的涂片，革蘭染色后鏡檢。（2）結(jié)核分枝桿菌涂片①挑取膿性或血性痰液制成薄而均勻的涂片，作抗酸染色鏡檢。②濃集法菌檢根據(jù)所見結(jié)果報告“找到(或未查到)抗酸桿菌”。（3）放線菌及諾卡菌涂片將痰液用生理鹽水洗滌數(shù)次，挑取黃色顆?；虿煌该鞯闹唿c，置載玻片上、覆以蓋玻片、輕輕擠壓，置高倍鏡下觀察其結(jié)構(gòu)、如見中央為交織的菌絲，末端呈放線狀

15、排列，然后揭去蓋玻片。干燥后作革蘭和抗酸染色鏡檢。如查見中間菌絲部分為革蘭陽性，四周放射菌絲為革蘭陰性，而抗酸染色陰性，可報告為“找到染色、形態(tài)疑似放線菌”如查見革蘭染色結(jié)果與放線菌相同，而抗酸染色弱陽性者，可報告為“找到染色、形態(tài)疑似奴卡菌”肉眼觀察未見黃色顆粒，革蘭染色與抗酸染色均為陰性，報告為陰性。結(jié)核分枝桿菌奴卡菌3.培養(yǎng)（1）培養(yǎng)標本的選擇：應(yīng)選擇粘液膿痰作涂片，排除不合格的標本。（2）痰標本培養(yǎng)前處理：用無菌生理鹽水將痰洗滌

16、3次，加入等量的1%胰酶溶液（PH7.6)，35C水浴90min，使痰液均質(zhì)化后備用。（3）分離培養(yǎng)處理后痰液接種于血瓊脂平板、巧克力瓊脂平板和麥康凱(或EMB，中國藍)瓊脂平板，置5%10%二氧化碳環(huán)境中，35℃培養(yǎng)1824h根據(jù)菌落及形態(tài)特點，作出初步判斷然后按各類細菌特征進行生化鑒定，并同時作藥物敏感測定。4.報告方式痰標本培養(yǎng)48小時后僅有草綠色鏈球菌生長而無致病菌生長，報告“正常菌群”。查出致病菌，報告菌名和藥敏結(jié)果，同時報告

17、細菌的量化指標(表53)，如“少量、中等或多量”。表53痰標本在平板上的菌落量化指標第四節(jié)尿標本中段尿培養(yǎng)加計數(shù)對于泌尿道感染的診斷有重要價值。細菌培養(yǎng)必須結(jié)合菌落計數(shù)辨別是否為病原菌。正常人中段尿細菌數(shù)≤103cfuml（一）尿液標本的采集1.中段尿采集法最常用2.直接導(dǎo)尿采集法易造成逆行感染，盡量不用3.留置導(dǎo)尿管收集尿液法注意不能從尿液收集袋中采集標本4.膀胱穿刺法（二）尿液標本中常見的病原菌細菌中80％為革蘭陰性桿菌，20％為革

18、蘭陽性菌（三）檢驗方法和操作流程【涂片檢查】取離心沉淀物涂片（1）一般細菌革蘭染色、鏡檢、報告（2）淋病奈瑟菌革蘭染色、鏡檢，如發(fā)現(xiàn)腎形雙球菌，可報告“檢出革蘭陰性雙球菌，位于細胞內(nèi)（或外），形似淋病奈瑟菌”（3）念珠菌革蘭染色、鏡檢，如發(fā)現(xiàn)芽生孢子和假菌絲，且革蘭染色陽性時，可報告“檢出念珠菌”。（4）結(jié)核分枝桿菌抗酸染色、鏡檢，如在藍色背景中查見紅色桿菌，報告“找到抗酸桿菌”。尿液標本細菌檢驗方法和操作流程（三）檢驗方法和操作流程【

19、細菌培養(yǎng)】1.一般細菌培養(yǎng)如培養(yǎng)2d無細菌生長，即可棄去。尿培養(yǎng)的步驟：（1）收集中段尿（2）用10μl標準接種環(huán)取尿液接種血平板（連續(xù)劃線）和中國藍平板（分區(qū)劃線）（3）35℃培養(yǎng)24h（4）菌落計數(shù)計數(shù)血平板上生長菌落，乘以稀釋倍數(shù)（100）得出cfuml。若整個平板菌落多得無法計數(shù)，可報告“菌落數(shù)105ml”。（5）若≤2種菌生長對每種菌進行鑒定和藥敏；若＞2種菌生長報告“混合菌群”。2.特殊細菌培養(yǎng)（1）淋病奈瑟菌培養(yǎng)（2）厭氧

20、菌培養(yǎng)（3）結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)3.報告方式培養(yǎng)48h無細菌生長，報告“2天無細菌生長”。查見細菌，報告菌名及其菌落計數(shù)（菌落數(shù)ml）和藥敏結(jié)果。第五節(jié)糞便標本正常情況下腸道中有多種細菌。引起感染性腹瀉的病原微生物有：（1）細菌性：產(chǎn)毒素型腹瀉、侵襲型腹瀉、食物中毒、慢性腹瀉。（2）真菌性（3）病毒性糞便標本細菌學(xué)檢驗方法和操作流程（一）標本采集1.自然排便法挑取黏液膿血或夾雜假膜部分的糞便2.直腸拭子法直腸拭子標本先增菌26h后轉(zhuǎn)種。糞便

21、標本直接轉(zhuǎn)種SS、中國藍等選擇培養(yǎng)基。培養(yǎng)基選用原則上是一強一弱搭配。（二）檢驗方法和操作流程1.涂片檢查糞便標本因各種正常菌群含量甚多，僅以染色性和形態(tài)無法分辯是否為病原菌。因此，糞便標本一般不作涂片檢查。2.培養(yǎng)判斷糞便培養(yǎng)出的細菌是否為致病菌，看其是否分解乳糖：致病菌一般不分解乳糖（SS平板上生長無色菌落）；條件致病菌除變形桿菌外，均能分解乳糖（SS平板上生長紅色菌落）（1）沙門志賀菌培養(yǎng)：①糞便接種于SS平板和中國藍平板；②挑選

22、SS平板上不發(fā)酵乳糖菌落，分別接種于三糖鐵瓊脂（KIA)和動力吲哚尿素培養(yǎng)基；③生化反應(yīng)，AF多價“O”血清或因子血清進行鑒定。（2）致病性大腸埃希菌培養(yǎng)（3）霍亂弧菌培養(yǎng)（4）副溶血弧菌培養(yǎng)（5）小腸結(jié)腸炎耶爾森菌培養(yǎng)（6）空腸彎曲菌培養(yǎng)（7）葡萄球菌培養(yǎng)（8）艱難梭菌培養(yǎng)（9）真菌培養(yǎng)3.報告方式報告菌種名稱藥敏試驗結(jié)果第六節(jié)膿液及病灶分泌物標本化膿性感染可由單種或多種細菌引起。常見病原菌主要有革蘭陽性菌：金黃色葡萄球菌、化膿性鏈球

23、菌、炭疽芽胞桿菌、破傷風(fēng)梭菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌、結(jié)核分枝桿菌革蘭陰性菌：大腸埃希菌、變形桿菌、銅綠假單胞菌、腐敗謝瓦菌，以及梭桿菌和擬桿菌等。其他病原菌：諾卡菌、放線菌、念珠菌膿液和創(chuàng)面分泌物標本細菌學(xué)檢查方法和操作流程（一）標本采集1.開放性膿液先以無菌生理鹽水沖洗潰瘍表面，再用2支滅菌棉拭取潰瘍底部或邊緣的分泌物，插入斯氏(Stuart)運送培養(yǎng)基內(nèi)送檢。一支為涂片檢查用，一支作培養(yǎng)用。2.封閉性膿腫消毒局部皮膚或粘膜表面后、用無菌注射

24、器穿刺抽取，將膿液注入無菌試管內(nèi)送檢。疑為厭氧菌感染時，應(yīng)作床邊接種或置厭氧運送培養(yǎng)基內(nèi)送檢。3.大面積燒傷的創(chuàng)面分泌物用滅菌棉拭子取多部位創(chuàng)面的膿液或分泌物。置滅菌試管內(nèi)送檢。4.放線菌標本可以用抽吸和拭子，對于瘺管可將無菌紗布置于其內(nèi)數(shù)小時后取出檢驗。（二）檢驗方法和操作流程1.涂片檢查膿液及分泌物涂片作革蘭染色境檢，根據(jù)形態(tài)和染色特點，可報告“查見革蘭X性菌，形似XX菌”或報告“末查見細菌”。泌尿、生殖道標本中發(fā)現(xiàn)革蘭陰性細菌，應(yīng)

25、注意尋找是否有細胞內(nèi)雙球菌（形似淋病奈瑟菌）。對疑有結(jié)核分枝桿菌的標本，加做抗酸染色；對疑為棒狀桿菌的標本，加做異染顆粒染色。閉鎖性膿腫的穿刺液標本含厭氧菌的可能性大。膿汁標本肉眼觀察，如發(fā)現(xiàn)1mm以下的灰白色或硫磺色顆粒，應(yīng)挑出至玻片上，以壓片法檢測是否為放線菌，繼之用革蘭染色和抗酸染色鏡檢，確定放線菌種類，并發(fā)出報告：找到XX放線菌。2.培養(yǎng)（1）普通菌培養(yǎng)標本接種血瓊脂平板和中國藍瓊脂平板，35℃培養(yǎng)18一24h后，根據(jù)菌落特性和

26、形態(tài)染色，作出初步判斷再按各類細菌的生物學(xué)特性進行鑒定。（2）厭氧菌培養(yǎng)取膿液標本接種厭氧血瓊脂平板及其他厭氧選擇平板，置于厭氧環(huán)境培養(yǎng)，根據(jù)生長情況及涂片染色結(jié)果，按厭氧菌生物學(xué)特性進行鑒定。（3）嗜血桿菌及奈瑟菌培養(yǎng)接種于巧克力瓊脂平板置二氧化碳環(huán)境中培養(yǎng)。（4）結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)一般將膿液約0.1ml直接接種到結(jié)核菌培養(yǎng)基，組織或臟器應(yīng)先迸行粉碎然后進行培養(yǎng)。（5）真菌培養(yǎng)一般可用沙氏培養(yǎng)基。3.報告方式查見致病菌，報告菌名和藥敏結(jié)