臍橙鈣調(diào)蛋白基因(CsCAB)的克隆、表達分析及轉(zhuǎn)化煙草的研究.pdf

1、奉節(jié)臍橙(Citurs sinensis L.Osbeck)是“華盛頓臍橙”品系的選優(yōu)株系。作為重慶市柑橘中的優(yōu)良品種，在內(nèi)外銷中具有著較強的競爭優(yōu)勢。然而，奉節(jié)臍橙果皮容易發(fā)生褐變，對臍橙果皮褐變的誘發(fā)因素已有大量研究，但在分子機理研究方面尚十分缺乏。
　　 通過對在本實驗室前期構(gòu)建的臍橙果皮褐變相關(guān)基因的cDNA差減文庫分析。篩選了一個與鈣調(diào)蛋白基因同源的EST序列，通過快速擴增cDNA末端（RACE）方法成功克隆得到全長，

2、命名為CsCAB，GenBank登錄號EF010854。前期工作已經(jīng)證明CsCAB是褐變相關(guān)蛋白，但對于CsCAB蛋白在臍橙褐變過程中的調(diào)控模式以及功能并不清楚。
　　 本研究首先運用半定量RT-PCR的方法分析了臍橙鈣調(diào)蛋白基因（CsCAB）在果皮褐變發(fā)生進程和不同組織中的表達模式。結(jié)果表明，CsCAB基因在不同的植物組織中表達豐度不同，伴隨果皮褐變指數(shù)的上升，CsCAB基因的表達增強。同時，本研究分析了在機械損傷的脅迫條件下

3、CsCAB的表達情況，結(jié)果表明CsCAB及其下游靶基因ATPase和GAD受到機械損傷的誘導(dǎo)。由于鈣調(diào)蛋白本身并沒有功能，主要是通過傳遞信號給下游靶蛋白，從而調(diào)控著植物的生理過程。所以，果皮褐變的過程中，鈣調(diào)蛋白可能通過調(diào)控下游的一系列靶蛋白發(fā)揮著重要的作用。
　　 本研究以臍橙果皮為材料，提取RNA并進行RT-PCR擴增，克隆了CsCAB基因全長cDNA序列，并對其進行序列分析。結(jié)果表明，CsCAB包含一個621bp的開放閱讀