2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、多聚半乳糖醛酸酶(polygalacturonase,PG)是多種病原真菌的致病因子,是病原真菌入侵過程中分泌的第一個細(xì)胞壁降解酶。而多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白(Polygalaeturonase-inhibiting protein,PGIP)是一種特異性細(xì)胞壁結(jié)合蛋白,富含抗病基因所具有的亮氨酸重復(fù)序列(Leucine-rich repeat, LRR),非競爭性地抑制病原真菌PG酶的活性,減少PG對植物細(xì)胞壁的降解,誘導(dǎo)植物的抗病性

2、反應(yīng),從而抑制了真菌病害的發(fā)生。
   本實(shí)驗(yàn)以‘5BB’(Vtis berlandieri×V.riparia)、‘1202’(V.vinifera× V.rupestrsis)和‘Beta’(V.riparia×V.labrusca)三種葡萄砧木為材料,克隆了‘5BB’、‘1202’和‘Beta’PGIP基因,并用生物信息學(xué)的方法分析其結(jié)構(gòu)和功能。同時構(gòu)建了‘5BB'PGIP基因的高效表達(dá)載體(pYF7704),進(jìn)行了煙草的

3、遺傳轉(zhuǎn)化研究。現(xiàn)將主要研究結(jié)果匯總?cè)缦拢?br>   1.以葡萄砧木‘5BB’、‘1202’和‘Beta’葉片為試材,通過設(shè)計(jì)特異引物,PCR擴(kuò)增,從上述砧木基因組中分別得到1條全長1002bp的多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白基因序列(‘5BB’PGIP基因GenBank的登錄號:FJ530941;‘1202’PGIP基因GenBank的登錄號:GQ139363;‘Beta' PGIP基因GenBank的登錄號:GQ139364)。

4、   2.對‘5BB’、‘1202’和‘Beta' PGIP基因序列進(jìn)行生物信息學(xué)分析,結(jié)果表明,它們都包含1個完整的開放閱讀框;均編碼333個氨基酸,蛋白質(zhì)分子量分別為:37.07Kda、37.09 Kda和37.09 Kda;等電點(diǎn)分別為:8.683、8.684、8.257;疏水性和親水性分析及信號肽分析表明:第1-27個氨基酸殘基是信號肽;序列同源比對結(jié)果顯示,與歐洲葡萄、其它果樹的相應(yīng)序列同源性分別為99%和68%;其推導(dǎo)的蛋

5、白質(zhì)序列中包含一段亮氨酸重復(fù)序列,三級結(jié)構(gòu)和菜豆PGIP相似.
   3.將構(gòu)建好的‘5BB'PGIP基因表達(dá)載體(pYF7704)通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化煙草,最終獲得102個抗性株系.經(jīng)過PCR檢測,從10株中擴(kuò)增出了目的條帶。進(jìn)一步的RT-PCR檢測結(jié)果表明,有5個為陽性株系.初步證實(shí),‘5BB'PGIP基因已經(jīng)整合到煙草的基因組中.通過對轉(zhuǎn)基因株系與未轉(zhuǎn)基因植株對照植株的SOD和CAT酶的活性檢測,發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)‘5BB’PGIP基

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