土霉素對中華絨螯蟹致病性螺原體的作用影響及其藥代動(dòng)力學(xué)研究.pdf

1、中華絨螯蟹Eriocheir sinensis(俗稱河蟹)是我國淡水名產(chǎn)之一,近年來隨著養(yǎng)殖規(guī)模的擴(kuò)大,河蟹的病害問題U顯突出,其中“顫抖病”最為常見,是河蟹養(yǎng)殖過程中危害最嚴(yán)重的一種疾病。本實(shí)驗(yàn)室成功分離出了顫抖病病原,并最終確定其為螺原體類微生物。
　　 為了控制病害發(fā)生,本文首先開展了顫抖病藥物防治研究。體外藥敏試驗(yàn)表明蝦蟹螺原體對土霉素極其敏感,MIC和MBC分別為0.04,0.62 mg L-1。通過運(yùn)動(dòng)性試驗(yàn)、生長曲

2、線以及電鏡觀察等發(fā)現(xiàn):隨著濃度加大,螺原體的運(yùn)動(dòng)性受到抑制,指數(shù)生長期滯后,菌體最大數(shù)量減小,菌體細(xì)胞膜出現(xiàn)破損。急性毒性試驗(yàn)顯示土霉素對河蟹安全性低毒,24hLD50和48hLD50分別為366,340 mg kg-1,安全濃度為82.5 mg kg-1?；馗兄委熢囼?yàn)結(jié)果說明最好存活率高達(dá)80％,最佳劑量為40mg kg-1。
　　 為了減少環(huán)境中的農(nóng)藥殘留,避免盲目用藥,本文進(jìn)行了土霉素在河蟹體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)研究。首先,建立

3、并優(yōu)化了一整套適于河蟹體內(nèi)土霉素殘留檢測的高效液相色譜檢測方法。優(yōu)化后的方法準(zhǔn)確度高、可靠性好。當(dāng)土霉素含量在0.1～20μg mL-1濃度范圍內(nèi)時(shí),從血淋巴中提取的回收率為91.85％～93.61％,日間和日內(nèi)精密度分別為8.56％和2.67％；從肌肉中提取的回收率為84.12％～102.9％,日間和日內(nèi)精密度分別為2.32％和6.69％；從肝臟中提取的回收率為74.18％～86.97％,日間和日內(nèi)精密度分別為2.62％和8.39％。

4、以引起3倍基線噪音的藥物濃度為檢測限(LOD),本法的LOD為0.015μgmL-1,比美國FDA之規(guī)定還要低一個(gè)數(shù)量級,滿足了后續(xù)研究的藥代動(dòng)力學(xué)分析要求。之后,本文從最低有效治療劑量到最佳劑量范圍內(nèi)設(shè)置了三種給藥劑量2,8,40 mg kg-1,在18±1℃的水溫條件下按肌肉注射方式給藥,分別分析了土霉素在血淋巴、肌肉、肝臟組織中的藥代動(dòng)力學(xué)特征。
　　 土霉素在血淋巴中的藥代動(dòng)力學(xué)特性:低劑量符合二室模型,中、高劑量則符合

5、帶一級吸收的二室模型:消除半哀期(t1/2β)為87.9～114.3 h；總體清除率分別為0.0430 L kg-1h-1,0.0123 L kg-1h-1,0.0013 L kg-1h-1；中央室表觀分布容積(Vc)分別為1.383,0.699,0.143 L kg-1,血淋巴凈化時(shí)間為13.6,29.6,57.6 d；結(jié)果表明40 mg kg-1的確具有最好的治療效果。
　　 土霉素存肌肉中的藥代動(dòng)力學(xué)特征:低價(jià)量給藥后藥物

6、濃度迅速下降,到8h就無法檢出,因此無法擬合；8 mg kg-1和40 mg kg-1劑量下的藥時(shí)曲線則符合帶一級吸收的三室模型；休藥期分別為48.3,56d;結(jié)果表明,土霉素在河蟹體內(nèi)分布廣泛；消除速率比魚類和其它甲殼了要慢；生產(chǎn)實(shí)踐中建議采用40 mgkg-1,根據(jù)藥代動(dòng)力學(xué)原理推算出來的合理劑量為36.37 mg kg-1。
　　 土霉素在肝胰腺中的藥代動(dòng)力學(xué)研究:單劑量肌肉注射給藥40mg kg-1體重情況下,肝胰腺藥時(shí)

7、曲線關(guān)系符合帶時(shí)滯的一級吸收一室開放模型:C=69.45×(e—0·005(t-0.0387)-e-8.195(t-0.0387)。主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)為:藥時(shí)曲線下總面積(AL/Co-∞)為16352.31μg h mL-1,藥物平均駐簾時(shí)間(MRTo-∞)為178.79 h,總體清除率(CLs)為0.00245 L kg-1h-1,表觀分布容積(Vd/F)為0.46 L kg-1,基于末端消除相的消除半衰期(t1/2β)為130.71