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1、氟苯尼考是新一代氯霉素類獸用合成抗生素,但目前包括藥物動(dòng)力學(xué)、風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估等方面的研究比較薄弱,往往造成盲目用藥,不但影響治療效果,而且易造成藥物殘留,影響水產(chǎn)品質(zhì)量安全,對(duì)水產(chǎn)業(yè)的穩(wěn)定、健康發(fā)展造成很大影響。中華絨鰲蟹產(chǎn)業(yè)在我國(guó)具有較大的發(fā)展前景,所以有必要對(duì)氟苯尼考在中華絨螯蟹中的檢測(cè)方法和藥物代謝動(dòng)力學(xué)進(jìn)行相關(guān)基礎(chǔ)性研究,所以本文主要研究?jī)?nèi)容分為以下幾個(gè)部分:(1)水產(chǎn)品中氟苯尼考?xì)埩舻臋z測(cè)方法研究;(2)給藥劑量對(duì)氟苯尼考在中華絨鰲
2、蟹體內(nèi)的藥物代謝動(dòng)力學(xué)影響的研究;(3)水溫對(duì)氟苯尼考在中華絨鰲蟹體內(nèi)的藥物代謝動(dòng)力學(xué)影響的研究,具體如下:
1.建立了水產(chǎn)品中氟苯尼考?xì)埩舻臋z測(cè)方法。高效液相色譜-熒光法以乙酸乙酯為提取溶液,C18固相萃取柱為凈化柱,采用Agilent TC-C18反相色譜柱(250mm×4.6mm,5μm),以10mmol·L-1乙酸銨緩沖液(pH3.5)和乙腈為流動(dòng)相(體積比55:45),熒光檢測(cè)激發(fā)波長(zhǎng)為225nm,發(fā)射波長(zhǎng)為28
3、0nm。結(jié)果顯示,氟苯尼考在0.1~5μg·mL-1范圍內(nèi)與峰面積呈線性相關(guān),相關(guān)系數(shù)為0.9999。當(dāng)空白樣品中氟苯尼考添加水平為40~1000μg-kg-1時(shí),該方法的回收率為88.6%~95.4%,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.51%~8.28%,檢出限為5.6μg·kg-1。液-質(zhì)聯(lián)用法以乙酸乙酯為提取溶液,流動(dòng)相為甲醇和水,采用ESI負(fù)離子掃描,選擇反應(yīng)監(jiān)測(cè)(SRM)模式檢測(cè),結(jié)果顯示,氟苯尼考在1~100ng·mL-1范圍內(nèi)與峰面積呈線
4、性相關(guān),相關(guān)系數(shù)大于0.999。測(cè)定的回收率為86.6%~90.5%,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為5.21‰~7.28%。同時(shí)比較了兩種方法的優(yōu)缺點(diǎn),為水產(chǎn)品中氟苯尼考?xì)埩袅康臋z測(cè)提供一定的技術(shù)參考。
2.研究不同劑量氟苯尼考在中華絨螯蟹血淋巴、肌肉和肝臟組織中的代謝規(guī)律和組織分布的影響。在17℃水溫下,按5.0、10.0、20.0mg·kg-1劑量單次肌肉注射給藥,高效液相色譜法-熒光法測(cè)定中華絨螯蟹血淋巴、肌肉和肝臟中藥物殘留濃度,
5、試驗(yàn)結(jié)果采用Origin8.0數(shù)據(jù)處理軟件繪制藥物濃度-時(shí)間曲線,利用3P97藥代動(dòng)力學(xué)軟件分析數(shù)據(jù)。研究結(jié)果表明,在3種給藥劑量下,血淋巴和肌肉組織中氟苯尼考含量瞬時(shí)達(dá)到峰值,而肝臟中氟苯尼考含量則隨給藥時(shí)間,先上升后下降,各組織含量從大到小依次為:肌肉、血淋巴、肝臟。應(yīng)用藥代動(dòng)力學(xué)計(jì)算軟件3P97分析結(jié)果表明:血淋巴、肌肉、肝臟組織中氟苯尼考的代謝規(guī)律均符合二室開放模型,主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù):血淋巴中氟苯尼考的吸收半衰期(T1/2α)
6、和消除半衰期(T1/2β)分別為0.04、0.21、0.87h和0.60、1.48、3.29h,整體清除率(CLs)分別是2.17、1.99和2.12mL·kg-1·h-1,肌肉中氟苯尼考的吸收半衰期(T1/2α)和消除半衰期(T1/2β)分別是1.38、0.93、0.47h和10.39、31.78、23.91h,整體清除率(CLs)分別是0.07、0.03、0.03mL·kg-1·h-1,肝臟中氟苯尼考的吸收半衰期(T1/2α)和消除
7、半衰期(T1/2β)分別是0.69、0.07、0.12h和0.73、4.90、4.49h,整體清除率(CLs)分別是1.79、2.55、3.89mL·kg-1.h-1。
3.研究不同水溫(17℃和28℃)條件下,單劑量(5mg·kg-1)肌肉注射氟苯尼考,在中華絨鰲蟹體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)。高效液相色譜法-熒光法測(cè)定中華絨螯蟹血淋巴、肌肉和肝臟中藥物殘留濃度,試驗(yàn)結(jié)果采用Origin8.0數(shù)據(jù)處理軟件繪制藥物濃度-時(shí)間曲線,利用3
8、P97藥代動(dòng)力學(xué)軟件分析數(shù)據(jù)。結(jié)果表明,中華絨螯蟹各組織中氟苯尼考的代謝規(guī)律均符合二室開放模型,17℃組和28℃組血淋巴中的消除半衰期(T1/2β)分別為0.60h和0.41h,藥-時(shí)曲線下面積(AUC)分別為2.30和1.92mg·mL-1·h,肌肉中T1/2β分別為10.99h和73.89h,AUC分別為69.36和112.58mg·mL-1·h,肝臟中T1/2β分別為0.73h和20.57h,AUC分別為2.79和11.65mg·
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