遼寧新品系絨山羊角蛋白家族基因的表達研究.pdf

1、角蛋白家族基因主要包括角蛋白及角蛋白關(guān)聯(lián)蛋白兩大類基因，是羊絨的主要結(jié)構(gòu)蛋白，與羊絨的優(yōu)良品質(zhì)密切相關(guān)。據(jù)相關(guān)研究證實，BMP信號通路是與毛囊生長相關(guān)的信號通路之一，能夠間接調(diào)控毛囊生長，進而影響毛發(fā)類型及絨毛的直徑。
　　為了進一步研究角蛋白家族基因與羊絨的粗細度之間的關(guān)系，以及角蛋白家族基因與BMP介導的信號通路之間是否存在聯(lián)系，利用實時熒光定量PCR技術(shù)檢測K26、KAP26.1、KAP6.2、KAP7.1以及KAP8.2基

2、因分別在興盛期、退行期、休止期在毛囊中的表達量。利用半定量RT-PCR技術(shù)對上述5個基因在毛囊退行期皮膚組織、耳組織及毛囊生長期皮膚細胞中的表達情況進行了檢測。利用RNA干擾技術(shù)，構(gòu)建BMP信號通路抑制劑Noggin基因的慢病毒干擾載體，有效敲減羊皮膚細胞中Noggin基因，再次利用熒光定量PCR技術(shù)檢測相關(guān)角蛋白家族基因的表達情況。
　　實驗結(jié)果如下:(1)熒光定量PCR結(jié)果顯示:在毛囊興盛期，KAP7.1、KAP8.2、KAP

3、26.1及K26在次級毛囊中的表達量均高于初級毛囊(p＜0.01);進入毛囊退行期，這四個基因在初級毛囊中的表達量反而高于次級毛囊，其中KAP8.2的表達差異顯著（p＜0.05)，KAP26.1及K26的表達差異極顯著（p＜0.01)。而KAP6.2基因在初次級毛囊中的表達趨勢與上述四個基因恰好相反。在毛囊休止期，皮膚中K26及KAP26.1基因的相對表達量較退行期時明顯減少，其余3個基因與退行期時相似。(2)半定量RT-PCR實驗結(jié)果

4、顯示，這5個基因在退行期皮膚、耳組織以及毛囊生長期皮膚細胞中的表達情況各不相同。KAP6.2、KAP7.1、KAP8.2、KAP26.1這四個基因在上述組織中均表達，但表達量上存在差異。而K26基因僅在毛囊生長期皮膚細胞中有少量的表達。(3) RNA干擾實驗結(jié)果:構(gòu)建了特異性干擾Noggin基因的慢病毒干擾載體;抑制Noggin基因的表達后，對相關(guān)角蛋白家族基因的表達進行了熒光定量PCR檢測發(fā)現(xiàn)，除KAP8.2基因外，KAP6.2、KA

5、P7.1、K26及KAP11.1的相對表達量均呈下降趨勢。
　　由以上結(jié)果我們可以得出以下結(jié)論:1）KAP6.2、KAP7.1、KAP8.2、K26及KAP26.1在絨毛形成的不同時期在初、次級毛囊中及不同組織中的表達量是不同的，由此可以推斷這些基因可能對絨毛生長的粗細度及毛囊的周期性變化有重要的調(diào)控作用。2）干擾Noggin基因的表達能夠抑制相關(guān)角蛋白家族基因的表達。這些發(fā)現(xiàn)為今后繼續(xù)研究BMP信號通路與角蛋白家族基因的聯(lián)系提供