臨床健康豬群中PRRSV的分離與鑒定.pdf

1、豬繁殖與呼吸綜合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS）是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（Porcine reproductive and respiratorysyndrome virus，PRRSV）引起的危害養(yǎng)豬生產(chǎn)的重要病毒性疫病，以繁殖母豬的流產(chǎn)、產(chǎn)弱仔、死胎、木乃伊胎等繁殖障礙以及仔豬與育肥豬的呼吸道疾病為特征，從2006年5月底開始流行于江西、湖南等省份的部分豬場(chǎng)

2、的高熱綜合征給我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。田克恭等報(bào)道此高熱征的病因是以Nsp2第483和535-563位氨基酸缺失為特征的高致病性PRRSV毒株，2007年對(duì)豬場(chǎng)PRRSV的調(diào)查中發(fā)現(xiàn)，臨床健康的豬群也存在變異株的感染，2008年至2009年，大部分豬場(chǎng)存在健康豬帶毒現(xiàn)象，因此有學(xué)者認(rèn)為，Nsp2基因缺失可能不是PRRSV高致病性的主要因素。我們從臨床健康豬群中檢測(cè)到Nsp2缺失的毒株，這些豬群生產(chǎn)正常，沒(méi)有出現(xiàn)死亡，因此我們對(duì)檢

3、測(cè)到的病毒進(jìn)行病毒分離與基因擴(kuò)增，分析是否存在其他的基因變異在起作用。
　　 本研究主要包括以下幾方面內(nèi)容：
　　 1、通過(guò)RT-PCR方法對(duì)2008年12月至2009年12月送檢的157份臨床病料進(jìn)行了PRRSV檢測(cè)，共鑒定出116份PRRSV陽(yáng)性病料，陽(yáng)性率達(dá)73.9％。這些病例主要表現(xiàn)為病豬體溫升高，多在39.2～42℃之間，呈稽留熱，表現(xiàn)為呼吸道癥狀或繁殖.呼吸道癥狀，多數(shù)病豬皮膚發(fā)紅，伏臥，嗜睡。病理變化主要表

4、現(xiàn)為淋巴結(jié)水腫、出血和彌漫性肺炎，還有部分表現(xiàn)為腸壁變薄、脾臟輕度出血。另外，對(duì)山東省9個(gè)豬場(chǎng)的678份血清進(jìn)行了PRRSV檢測(cè)，共鑒定出37份PRRSV陽(yáng)性血清。本研究將部分陽(yáng)性病料，通過(guò)在Mark-145細(xì)胞上增值，共分離到6株P(guān)RRSV毒株。
　　 2、參考已發(fā)表基因序列，設(shè)計(jì)針對(duì)PRRSV的特異性引物分別擴(kuò)增LY株（從健康豬群陽(yáng)性血清中分離到）和JN株（從PRRS典型癥狀豬群中分離到）的Nsp2、ORF4、ORF5、OR

5、F6基因和ORF7基因。結(jié)果發(fā)現(xiàn)LY株與JX株的Nsp2均為1+29個(gè)氨基酸缺失，與JXA1的核苷酸和氨基酸高度同源，LY株與JX株的ORF4、ORF5、ORF6、ORF7的氨基酸的同源性在92.5％～100％之間。LY與JX株的ORF4、ORF5、ORF6、ORF7的糖基化位點(diǎn)完全一致，與JXA1的糖基化位點(diǎn)有差異，在ORF4中LY和JN的130位糖基化位點(diǎn)為NFT，JXAl的為NFS；在ORF5中LY和JN的N35糖基化位點(diǎn)為NSS