豬肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞(PAECⅡ)的分離純化及感染HP-PRRSV的研究.pdf

1、肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞(alveolar epithelial typeⅡ cell)是構(gòu)成哺乳類動物肺泡上皮的主要細(xì)胞之一，是合成和分泌肺泡表面活性物質(zhì)的主要細(xì)胞。肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞(AECⅡ)幾乎為所有肺臟細(xì)胞的始祖。豬繁殖與呼吸綜合征病毒(Porcine reproductive andrespiratory syndromevirus，PRRSV)是一種具有囊膜、單股正鏈的RNA病毒，分類于動脈炎病毒科、動脈炎病毒屬，是豬繁殖和呼吸系統(tǒng)

2、障礙綜合征(PRRS)的病原體。PRRSV感染的主要細(xì)胞是免疫系統(tǒng)的巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞。在肺臟中，PRRSV感染的靶細(xì)胞PAM為公認(rèn)的首選研究對象，而PRRSV感染PAECⅡ的研究仍顯薄弱。本實(shí)驗(yàn)通過灌洗仔豬肺臟然后使用免疫粘附法分離純化PAECⅡ，通過堿性磷酸酶染色及電鏡觀察確定PAECⅡ的純度。最后以HP-PRRSV感染PAECⅡ作為研究對象，檢測感染后不同時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞內(nèi)PRRSV的N蛋白變化，探究HP-PRRSV能否感染PAECⅡ。

3、研究結(jié)果如下:
　　1.通過肺灌洗及彈性蛋白酶消化法分離PAECⅡ，然后采用免疫粘附法進(jìn)一步對PAECⅡ進(jìn)行純化，利用堿性磷酸酶染色及透射電鏡對其進(jìn)行純度及特征的確定。結(jié)果顯示，彈性蛋白酶消化和IgG粘附可以產(chǎn)生較高純度的PAECⅡ，電鏡下可以觀察到PAECⅡ表面有微絨毛，細(xì)胞內(nèi)有其特異性結(jié)構(gòu)板層小體，說明所分離的細(xì)胞是PAECⅡ細(xì)胞。
　　2.HP-PRRSV感染PAECⅡ后分別對0h，12h，24h的細(xì)胞進(jìn)行間接免疫熒光