鏈霉菌neau3次級(jí)代謝產(chǎn)物的提取、分離及結(jié)構(gòu)鑒定.pdf

1、尼莫克?。∟emadectin）是由藍(lán)灰鏈霉菌（Streptomycescyaneogriseussp.Noncyanogenus）產(chǎn)生的十六元大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，和阿維菌素與米爾貝霉素一樣，表現(xiàn)出很好的抗寄生蟲(chóng)活性。作為抗寄生蟲(chóng)抗生素，尼莫克汀具有殺蟲(chóng)譜廣，易降解，低殘留，無(wú)抗藥性，對(duì)人畜無(wú)害，環(huán)境污染少等優(yōu)點(diǎn)，并且還可由尼莫克汀合成活性更強(qiáng)的莫西克?。∕oxidectin）。本研究不但豐富了尼莫克汀及米爾貝霉素類化合物的結(jié)構(gòu)多樣性，而

2、且還為今后研究其構(gòu)效關(guān)系、優(yōu)化其分子結(jié)構(gòu)，開(kāi)發(fā)更加高效低毒、低殘留的大環(huán)內(nèi)酯類農(nóng)用抗生素提供了必要基礎(chǔ)。
　　 我們實(shí)驗(yàn)室在篩選新的抗寄生蟲(chóng)抗生素的過(guò)程中，獲得了一株新的尼莫克汀產(chǎn)生菌（Streptomycesmicroflavusneau3），進(jìn)一步通過(guò)HPLC分析它的次級(jí)代謝產(chǎn)物并與其它尼莫克汀產(chǎn)生菌的次級(jí)代謝產(chǎn)物相比，發(fā)現(xiàn)該菌株的液相譜圖中呈現(xiàn)出更多的尼莫克汀類化合物的特征吸收峰。因此，為了發(fā)現(xiàn)更多與更好的抗寄生蟲(chóng)抗生素，

3、我們?cè)诒疚闹袑?duì)該菌的次級(jí)代謝產(chǎn)物進(jìn)行了詳細(xì)的研究。
　　 1）對(duì)該尼莫克汀產(chǎn)生菌株進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵培養(yǎng)基配方為（g/L）：葡萄糖10，乳糖25，棉籽餅粉25，CaCO30.3，pn7.0，用蒸餾水配制，于121℃下滅菌20min。采用液體搖瓶發(fā)酵，按8％（V/V）接種量接入到1L發(fā)酵搖瓶中，發(fā)酵搖瓶為裝液量100ml/1L三角燒瓶。置于250rpm旋轉(zhuǎn)式搖床，28℃發(fā)酵培養(yǎng)7-8d。
　　 2）將所得發(fā)酵培養(yǎng)液進(jìn)行合并，經(jīng)

4、濾布過(guò)濾得菌絲體濾餅，濾餅經(jīng)水洗后再用甲醇浸泡過(guò)夜。浸提液在45℃減壓條件下濃縮至適當(dāng)體積，再用等體積乙酸乙酯萃取三次，萃取液在減壓條件下濃縮得到浸膏?？偨嘟?jīng)硅膠柱色譜層析、SephadexLH.20凝膠柱色譜層析及半制備反向高效液相色譜層析等分離、純化得到12個(gè)次級(jí)代謝產(chǎn)物。
　　 3）將所得化合物經(jīng)過(guò)1H-NMR，13C-NMR，紅外，紫外，質(zhì)譜，1H-1HCOSY，HMQC，HMBC等波譜分析方法進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定，結(jié)果有2個(gè)

5、化合物是新化合物，分別為：
　　 8-demethyi-25-（1，3-dimethyl-1-butenyl）-23-hydroxyMilbemycinβ3（1）和Seco-nemadectin（2）
　　 其余10個(gè)為已知化合物，分別為：Nemadectin（3），Doramectin（4），AvermectinB1a（5），AvermectinB1b（6），LL-F28249v（7），23-DesoxyFactorA