砷對(duì)巨噬細(xì)胞和肝細(xì)胞膽固醇流出及相關(guān)基因ABCA1和ABCG1表達(dá)的影響.pdf

1、目的:流行病學(xué)和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果均顯示砷暴露是血脂異常和動(dòng)脈粥樣硬化的危險(xiǎn)因子，膽固醇外流的主要通道蛋白腺三磷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體A1(ABCAl)、ABCG1和清道夫受體BI(SR-BI)是維持體內(nèi)膽固醇穩(wěn)態(tài)的關(guān)鍵因子，在抗動(dòng)脈粥樣硬化形成中發(fā)揮關(guān)鍵作用，但砷對(duì)膽固醇流出及相關(guān)通道基因的影響并不很清楚。本研究的目的是為了明確砷對(duì)巨噬細(xì)胞和肝細(xì)胞膽固醇流出率及膽固醇流出通道基因表達(dá)的影響，為闡明砷導(dǎo)致血脂異常及與動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生機(jī)制提供理論依據(jù)。

2、
　　方法:THP-1及小鼠原代巨噬細(xì)胞培養(yǎng)于RPMI1640培養(yǎng)基中，加入LXR/RXR激動(dòng)劑（4μg/ml22R-OHC和10μmol/L9-cis-RA）預(yù)處理6h，隨后加入終濃度分別為0.625、1.25、2.5和5μM的亞砷酸鈉(NaAsO2)處理18h;L-02肝細(xì)胞系及小鼠原代肝細(xì)胞培養(yǎng)于DMEM高糖培養(yǎng)基中，以2、4、6、8、16μM NaAsO2處理48h。以LXR/RXR激動(dòng)劑預(yù)處理6h，隨后加入2.5μM N

3、aAsO2處理THP-1細(xì)胞48h，隨后在不含砷條件下繼續(xù)培養(yǎng)48h，分別于12、24、36、42、48、60、72、84、96h內(nèi)后收集細(xì)胞;12μM NaAsO2處理L-02細(xì)胞48h，隨后在不含砷條件下繼續(xù)培養(yǎng)48h，分別于12、24、36、42、48、60、72、84、96h內(nèi)后收集細(xì)胞;。定量PCR(qPCR)以及蛋白印跡(Western blot)技術(shù)檢測(cè)ABCA1、ABCG1和SR-BI基因表達(dá)水平;3H同位素示蹤分析細(xì)胞

4、內(nèi)膽固醇流出率。
　　結(jié)果:在THP-1巨噬細(xì)胞和小鼠原代巨噬細(xì)胞內(nèi)，0.625μM及更高濃度NaAsO2可顯著降低ABCA1 mRNA水平，1.25μM及更高濃度NaAsO2可顯著降低ABCG1 mRNA水平，對(duì)SR-BI水平未見(jiàn)顯著影響，ABCA1、ABCG1和SR-BI的蛋白表達(dá)水平的變化與基因水平一致，3H同位素示蹤膽固醇，閃爍計(jì)數(shù)結(jié)果顯示，在1.25μM及更高濃度NaAsO2可顯著降低膽固醇流出率。在L-02細(xì)胞和小鼠原

5、代肝細(xì)胞內(nèi)，4μM及更高濃度NaAsO2可顯著提升ABCA1 mRNA和ABCG1 mRNA水平，但對(duì)SR-BI水平?jīng)]有顯著性影響，ABCA1、ABCG1和SR-BI的蛋白表達(dá)水平的變化與基因水平一致，并且在8μM及更高濃度NaAsO2可顯著提高膽固醇流出率。2.5μM NaAsO2處理THP-1巨噬細(xì)胞，在12h后THP-1巨噬細(xì)胞內(nèi)ABCA1的表達(dá)有顯著性降低，42h時(shí)ABCA1的表達(dá)達(dá)到最低值，降低了約60％，之后不再繼續(xù)降低;去

6、除砷24h后ABCA1的表達(dá)量開(kāi)始增加，到36h后回復(fù)到初始水平。2.5μM NaAsO2處理THP-1巨噬細(xì)胞24h后膽固醇流出率顯著降低，42h后到最低值，隨后不再繼續(xù)降低;去砷培養(yǎng)24h后膽固醇流出開(kāi)始增加，到36h后恢復(fù)到初始水平。12μM NaAsO2處理L-02細(xì)胞，12h后L-02細(xì)胞內(nèi)ABCA1的表達(dá)就有顯著性的提升，36h時(shí)ABCA1的表達(dá)達(dá)到最高值，增加了約2.5倍，隨后不再隨時(shí)間延長(zhǎng)也增加;去除砷12h后ABCA1

7、的表達(dá)量開(kāi)始降低，到36h后回復(fù)到初始水平。12μMNaAsO2處理L-02細(xì)胞24h后膽固醇流出顯著增加，36小時(shí)達(dá)到峰值，隨后不再增加;去砷培養(yǎng)12h后開(kāi)始降低，24h恢復(fù)到初始水平。THP-1巨噬細(xì)胞和L-02細(xì)胞的膽固醇流出也具有與ABCA1基因表達(dá)一致的時(shí)效性。采用t檢測(cè)法統(tǒng)計(jì)分析不同處理?xiàng)l件下基因表達(dá)水平及膽固醇流出率差異， P＜0.05具有顯著性差異。
　　結(jié)論:砷對(duì)膽固醇的流出及相關(guān)基因表達(dá)的影響具有組織特異性，以