野大麥鹽誘導(dǎo)基因的篩選與克隆.pdf

1、土壤鹽漬化是影響農(nóng)業(yè)生產(chǎn)和生態(tài)環(huán)境的重要因子。培育耐鹽農(nóng)作物新品種是解決農(nóng)作物鹽脅迫的根本有效途徑，而發(fā)掘、研究植物耐鹽基因資源是培育耐鹽新品種的重要途徑。研究鹽生植物的耐鹽特性，并篩選和克隆鹽誘導(dǎo)基因，將為植物耐鹽基因表達(dá)機(jī)理的研究、以及進(jìn)一步培育高耐鹽力作物新品種奠定基礎(chǔ)。 野大麥(Hordeumbrevisubulatum(Trin.)Link)是禾本科小麥族中耐鹽性最強(qiáng)的鹽生植物之一，在長(zhǎng)期進(jìn)化中形成了一套特殊的適應(yīng)機(jī)制

2、，具有重要的研究和應(yīng)用價(jià)值。 為了充分了解野大麥的耐鹽特性及挖掘、利用其重要耐鹽基因，本研究以野大麥為材料分析了在鹽脅迫下的耐鹽生理響應(yīng)，并應(yīng)用cDNA-AFLP技術(shù)篩選和克隆了野大麥鹽誘導(dǎo)基因(片段)，取得結(jié)果如下： 1、野大麥在鹽脅迫下的耐鹽生理響應(yīng)研究。比較了野大麥和典型甜土植物-小麥在NaCl脅迫下幼苗葉片質(zhì)膜透性、含水量、地上和根部離子含量、脯氨酸含量、磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPCase)活性的生理響應(yīng)，明

3、確了野大麥的耐鹽范圍，探討了野大麥可能的耐鹽生理機(jī)制。結(jié)果顯示，隨鹽脅迫濃度增加，野大麥的細(xì)胞膜透性、Na+含量、脯氨酸含量、Na+/K+比、PEPCase活性增加，而含水量、K+含量下降；其中脯氨酸含量增加幅度小于小麥，說明在鹽脅迫下野大麥不是通過脯氨酸的積累來達(dá)到體內(nèi)滲透平衡的；而野大麥PEPCase活性增加明顯高于小麥，說明提高光合效率可能是野大麥實(shí)現(xiàn)鹽適應(yīng)的主要措施之一。 2、利用RNA指紋技術(shù)cDNA-AFLP(cDN

4、A-amplifiedfragmentlengthpolymophism)分析了野大麥在鹽脅迫和非鹽脅迫下根部基因表達(dá)的差異。采用256對(duì)引物篩選出40個(gè)差異表達(dá)的cDNA片段，通過ReverseNorthernBlotting進(jìn)一步鑒定出10個(gè)陽性差異表達(dá)cDNA片段，通過Blast分析，有8個(gè)TDFs與已知基因有一定的同源性，其中TDF1916與一系列蛋白激酶有較高的同源性。利用SMARTRACE技術(shù)得到該基因cDNA全長(zhǎng)，為156