小麥抗寒相關(guān)基因克隆及序列特征分析.pdf

1、低溫傷害不僅會(huì)限制農(nóng)作物的栽種范圍，也會(huì)造成農(nóng)作物減產(chǎn)。每年全世界因低溫冷害造成的農(nóng)作物損失多達(dá)數(shù)千億元，研究并提高植物抗寒力具有重要的理論意義和現(xiàn)實(shí)意義。為了闡明冷誘導(dǎo)基因與小麥幼苗抗寒性的關(guān)系，本文選取來自于全國(guó)各個(gè)麥區(qū)及部分外引種質(zhì)共260份小麥資源，進(jìn)行了幼苗抗寒性鑒定及冷誘導(dǎo)基因STS檢測(cè)。根據(jù)NCBI上公布的24個(gè)冷誘導(dǎo)基因的mRNA序列，分別設(shè)計(jì)引物對(duì)260份材料進(jìn)行擴(kuò)增，結(jié)果表明：Wrab19（登錄號(hào)：AF139915）

2、、Wcs19（登錄號(hào)：L13437）、Wrab17(登錄號(hào)：AF255053)三個(gè)冷誘導(dǎo)基因與小麥抗寒性有一定關(guān)聯(lián)，主要結(jié)果如下：
　　 1．實(shí)驗(yàn)室抗寒性鑒定結(jié)果表明，260個(gè)品種的抗寒性分布廣泛，品種間差異極顯著，所有品種的抗寒性變幅為0.0～1.0，表現(xiàn)出較為明顯的表型差異。
　　 2.利用所設(shè)引物對(duì)Wrab19基因進(jìn)行擴(kuò)增時(shí)，表現(xiàn)出較好的多態(tài)性，260份材料中，133個(gè)品種擴(kuò)增出兩條帶，長(zhǎng)度分別為690bp和 12

3、00bp；127個(gè)品種擴(kuò)增出一條帶，長(zhǎng)度為690bp。隨機(jī)挑選4個(gè)抗寒性不同的品種進(jìn)行測(cè)序，品種名稱為Serra、02Y151、宿9908、CP93181115，其中前兩個(gè)品種序列與目的序列基本一致，而后兩個(gè)品種序列在222bp處多出一段33bp的序列，推測(cè)可能是等位基因。
　　 3．利用引物對(duì)260份材料進(jìn)行wcs19基因檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，該引物特異性較好，但在品種間沒有多態(tài)性，260份材料均檢測(cè)出wcs19基因。進(jìn)一步的序列分

4、析表明，wcs19基因DNA序列含有一段121122bp的內(nèi)含子，且該內(nèi)含子序列中包含一個(gè)SNP，即，內(nèi)含子序列+9bp 處G堿基的插入和缺失，此內(nèi)含子及內(nèi)含子中的SNP與幼苗抗寒性的關(guān)系還需進(jìn)一步研究確定。
　　 4．利用所設(shè)引物對(duì)wrab17基因進(jìn)行擴(kuò)增時(shí)，引物擴(kuò)增特異性較好，預(yù)計(jì)目標(biāo)片段468bp，但實(shí)際擴(kuò)增出610bp的片段，同時(shí)在品種間沒有出現(xiàn)多態(tài)性，260份材料均檢測(cè)出wrab17基因。隨機(jī)選取兩個(gè)抗寒性不同的品種進(jìn)