魚類白介素4及其受體IL-4Rα的分子鑒定與功能研究.pdf

1、論文以模式生物斑馬魚作為研究對象，開展了魚類白介素-4(interleukin-4，IL-4)及其受體IL-4Rα的分子克隆與功能研究。
　　 論文第一部分為緒論部分，主要分兩個部分介紹了IL-4及其特異性受體IL-4Rα的研究近況。第一部分介紹了IL-4的發(fā)現(xiàn)、基因克隆、基因結構，表達調(diào)控機制、受體的組成、生物學功能以及相關信號傳導途徑等方面的研究結果和進展；第二部分主要介紹了IL-4Rα的基因克隆、表達調(diào)控、信號傳導、選擇剪

2、接形式及生物學功能等方面的研究進展。IL-4Rα和IL-4是高度親和的一對特異性相互作用的分子，兩者的親和作用對發(fā)揮IL-4的生物學功能起到了非常重要的作用。
　　 論文第二部分為實驗部分。主要分為三個小節(jié)：第一小節(jié)，為斑馬魚IL-4基因的克隆、生物信息學分析以及組織分布的鑒定，同時利用原核表達系統(tǒng)得到可溶型的重組斑馬魚IL-4蛋白質(zhì)。利用生物信息學軟件，分析了斑馬魚IL-4分子在進化上的規(guī)律，并且分析了其在進化上與高等脊椎動物

3、及其他物種的關系。第二部分，在斑馬魚中克隆得到了IL-4特異性受體IL-4Rα的基因，同時還克隆到一個IL-4Rα樣(IL-4Rα-L)的基因，與IL-4Rα基因座位相鄰，它與IL-4Rα基因在序列和結構上存在高度的同源性，最大的區(qū)別是IL-4Rα-L缺失大部分的胞內(nèi)區(qū)，同時兩者通過選擇性剪接均得到一個可溶形式的蛋白。我們對這四個分子進行了其在斑馬魚中組織分布的規(guī)律的研究，同時在原核表達系統(tǒng)中表達并純化得到可溶性的IL-4Rα蛋白質(zhì)，并

4、制備得到多克隆抗體。利用生物信息學軟件，對IL-4Rα及其IL-4Rα-L與其他物種中的IL-4Rα進行分析比對，發(fā)現(xiàn)IL-4Rα在基因結構，基因共線性，蛋白質(zhì)的空間構象，蛋白質(zhì)信號轉(zhuǎn)導的結合位點等各方面都是相當保守的。第三部分，我們對IL-4/IL-4Rα進行了功能分析，提供了IL-4和IL-4Rα作為一對特異性互作分子的證據(jù)，同時發(fā)現(xiàn)IL-4能刺激B細胞增殖，對抗體產(chǎn)生起上調(diào)作用，并且鑒定了IL-4提高Th2類細胞因子及轉(zhuǎn)錄因子的表