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文檔簡介
1、從鄭州郊區(qū)果園土壤中篩選出一株芽孢桿菌菌株YN-1,該菌株具有廣譜拮抗植物病原真菌作用,其發(fā)酵液在121℃下高壓滅菌20min,然后在4℃下儲存半年,仍然保持對多種植物病原真菌良好的抑菌活性。通過形態(tài)學觀察、生理生化特征鑒定、以及16SrDNA和ITS序列同源性分析表明該菌屬于解淀粉芽孢桿菌(Bacillus amyloliquefaciens)。通過綜合分析推測發(fā)酵液中可能含有生化特性穩(wěn)定的脂肽抗生素。
本研究包括3個方
2、面的研究內容:1.利用已知的脂肽抗生素合成相關基因序列設計4對特異引物對解淀粉芽孢桿菌YN-1菌株基因組進行基因檢測。2.按照脂肽抗生素分離純化方法定向對菌株YN-1發(fā)酵液活性物質進行提取,獲得粗提物質。研究粗提取物質的生化特性,并對粗提物質是否為解淀粉芽孢桿菌YN.1發(fā)酵液的主要成分進行驗證。3.利用HPLC對活性粗提物質進行檢測,探索活性粗提物質分離實驗參數(shù),然后以獲得的HPLC分離參數(shù)為依據(jù),利用HPLC-ESI-MS和MALDI
3、-TOF-MS檢測對活性粗提物進行定性定量分析。結果表明:1.解淀粉芽孢桿菌YN-1基因組中含有sfp、fenB、ituA或bamA基因;2.菌株YN-1發(fā)酵液粗提物特性與脂肽抗生素一致:具有廣譜抑制植物病原真菌活性,并且對溫度、對蛋白酶K不敏感。另外通過實驗證實粗提物質為菌株YN-1發(fā)酵液廣譜抗植物病原真菌物質的主要組分。3.通過梯度洗脫得到峰型較好、分辨率高的HPLC色譜圖,獲得活性粗提物質HPLC分離參數(shù)。LC-ESI-MS和MA
4、LDI-TOF-MS檢測分析表明活性粗提物中含有C14-IturinA、C15-IturinA、C16-IturinA、C14-FengycinA、C15-FengycinA、C16-FengycinA、C17-FengycinA、C16-FengycinB、C17-FengycinB九種脂肽抗生素,其中C16-IturinA、C14-FengycinA、C16-FengycinA、C17-FengycinA、C17-FengyeinB
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