抗植物病原真菌海洋黃桿菌及其活性物質(zhì)研究.pdf

1、對(duì)危害嚴(yán)重并難以控制的農(nóng)作物病原菌，急需尋找高效新靶標(biāo)活性物質(zhì)。在陸地尋找機(jī)率低的情況下，本研究從豐富而新穎的深海微生物資源中篩選出對(duì)農(nóng)作物病原菌具有穩(wěn)定拮抗作用的海洋黃桿菌WWP37(MCCC1A01368)，對(duì)其抗作物病原菌譜，抗菌物質(zhì)的分離、純化及初步鑒定，及其發(fā)酵條件進(jìn)行了研究，結(jié)果如下： 1.以水稻紋枯病、棉花枯萎病和油菜菌核病三類病原菌為指示菌株，對(duì)來自深海(2000-6000m)及臺(tái)灣海峽表面水的176株微生物進(jìn)行

2、了篩選，獲得了11株具有穩(wěn)定抗菌活性的細(xì)菌。其中黃桿菌屬WWP37對(duì)10種作物病原真菌抗菌能力最強(qiáng)，該菌株連續(xù)轉(zhuǎn)接10代抗菌活性穩(wěn)定。 2.理化性質(zhì)的研究表明，抗菌活性物質(zhì)能抵抗100℃的高溫，且在pH4-10和紫外照射等環(huán)境中穩(wěn)定。正丁醇萃取的粗提物，經(jīng)薄層層析純化，以抑制尖孢鐮刀菌生長(zhǎng)為指示對(duì)薄層層析板進(jìn)行了生物顯影，獲得了Rf=0.35、Rf=0.56兩條抑菌帶，表明抗菌物質(zhì)至少有兩種活性組分；經(jīng)Doskochilova溶

3、劑系統(tǒng)紙層析驗(yàn)證，該物質(zhì)與硫藤黃菌素的紙層析圖譜極為相近。 3.抗菌物質(zhì)經(jīng)有機(jī)溶劑萃取、凝膠層析(SephadexLH-20)、固相萃取(C18SPE)純化，再經(jīng)高效液相色譜(HPLC)分離、收集沈脫峰，檢測(cè)其抑菌活性，證明組分BF-1活性較強(qiáng)，LC/MS測(cè)得其分子量為699Da。紫外掃描顯示，BF-1特征峰與硫藤黃菌素和金絲菌素特征吸收峰基本相同，初步確定BF-1為金絲菌素類抗生素。但BF-1只對(duì)病原真菌有抑制效果且分子量達(dá)到

4、699Da，卻與現(xiàn)有金絲菌素類抗生素不同。因此，該物質(zhì)極有可能是一種新抗生素，其結(jié)構(gòu)鑒定正在進(jìn)行中。 4.對(duì)菌株WWP37的發(fā)酵正交試驗(yàn)證明，產(chǎn)抗菌活性物質(zhì)的優(yōu)化發(fā)酵培養(yǎng)基配方為：蔗糖0.6％、酵母粉1.2％、NaCl1.4％、MgSO40.8％；優(yōu)化培養(yǎng)條件為：500mL三角瓶裝量100mL、pH8.0、培養(yǎng)溫度為28℃、搖床轉(zhuǎn)速200r/min、種子發(fā)酵液菌齡8h，接種量為7.0％，培養(yǎng)時(shí)間為24h。將發(fā)酵上清液稀釋60倍后

5、的的灌根處理接種油菜菌核病原菌的4-5片真葉的油菜幼苗21天后，防治效果可達(dá)76.7％。掃描電鏡觀察發(fā)現(xiàn)，對(duì)農(nóng)作物病原菌(尖孢鐮刀菌)的抑制作用表現(xiàn)為菌絲生長(zhǎng)減慢，粗細(xì)不均且分支少，壁破裂，原生質(zhì)泄漏。 海洋黃桿菌群未見有產(chǎn)抗農(nóng)作物病原真菌抗生素的研究，本文做了此方面的報(bào)道。BF-1初步確定為金絲菌素類抗生素，但其只對(duì)病原真菌有抑制效果且分子量達(dá)到699Da，卻與現(xiàn)有金絲菌素類抗生素不同，極有可能是一種新抗生素。到目前為止，還沒