解淀粉芽孢桿菌抑菌作用機(jī)理的探究.pdf

1、農(nóng)田的大規(guī)模種植，使得病蟲(chóng)害越發(fā)嚴(yán)重，從而導(dǎo)致目前盛行的化學(xué)防治方法過(guò)量濫用，導(dǎo)致了病原菌對(duì)藥物產(chǎn)生抗藥性，繼而又開(kāi)始增加藥量的一個(gè)惡性循環(huán)，而人們對(duì)環(huán)境安全、食品安全等問(wèn)題的關(guān)注也日漸增加，而生物防治對(duì)策正是在此時(shí)萌發(fā)并發(fā)展。
　　從青海高原環(huán)境的植物根際土壤中采集的土樣，分離得到的菌株QHL-52和QHL-30，通過(guò)菌落形態(tài)特征、顯微鏡特征、生理生化特性和保守區(qū)序列擴(kuò)增分析等手段，將其鑒定為解淀粉芽孢桿菌（Bacillus a

2、myloliquefaciens）；用平板對(duì)峙的方法和牛津杯的方法測(cè)定其抑菌譜，2株拮抗菌對(duì)多種植物病原菌，包括真菌和細(xì)菌，都有抑制作用；離體防效測(cè)定結(jié)果表明，2株拮抗菌的粗發(fā)酵液能有效防治番茄灰霉病(Botrytis cinerea)；通過(guò)透明圈法檢測(cè)到2株拮抗菌均能產(chǎn)生嗜鐵素（CAS）、葡聚糖酶、蛋白酶和淀粉酶。拮抗菌的發(fā)酵液進(jìn)行硫酸銨沉淀得到粗蛋白，通過(guò) SDS-PAGE檢測(cè)到有多條蛋白條帶。用鹽酸沉淀法對(duì)發(fā)酵液處理得到脂肽類(lèi)抗生

3、素，相關(guān)功能基因檢測(cè)表明2株拮抗菌中都含有伊枯草菌素和豐原素2種脂肽類(lèi)活性物質(zhì)的合成基因，而無(wú)表面活性素的合成基因。
　　抑菌機(jī)理探究試驗(yàn)表明2株拮抗菌均能夠誘導(dǎo)植物自身產(chǎn)生抗性，其中處理組番茄果實(shí)的 POD、SOD、PPO、PAL、APX、CAT活性均顯著高于對(duì)照組， MDA的含量顯著低于對(duì)照組的含量，說(shuō)明拮抗菌能夠誘導(dǎo)植物產(chǎn)生對(duì)自身有利的因素，抵御對(duì)自身不利的外界因素，與拮抗菌協(xié)同共同抵御不良環(huán)境或外界傷害。同時(shí)發(fā)酵液能破壞病

4、原菌細(xì)胞結(jié)構(gòu)，使灰霉菌菌絲產(chǎn)生結(jié)節(jié)，頂端膨大并產(chǎn)生大量分支，菌絲細(xì)胞縊裂，細(xì)胞質(zhì)外泄導(dǎo)致細(xì)胞死亡，使孢子壁之間粘連或直接破裂，對(duì)孢子的萌發(fā)起到明顯的抑制作用，并伴隨有大量的晶體出現(xiàn)。
　　對(duì)2株拮抗菌的抑菌物質(zhì)進(jìn)行分離純化后，得到不同組分的抑菌物質(zhì)，菌株QHL-52的主要抑菌物質(zhì)為揮發(fā)性物質(zhì)，同時(shí)通過(guò)對(duì)上清液中代謝物質(zhì)的提取和分離純化，得到的樣品同樣具有強(qiáng)烈的抑菌作用；QHL-30的主要抑菌物質(zhì)初步確定為蛋白類(lèi)物質(zhì)，可能也有脂肽類(lèi)