類固醇激素合成酶及相關受體表達與豬卵泡閉鎖過程的關系研究.pdf

1、卵泡發(fā)育過程中伴隨著大量卵泡的退化，卵泡在到達排卵之前所發(fā)生的退化過程即卵泡閉鎖（atresia）。卵泡閉鎖是卵泡形成以后生殖細胞退化的主要方式，在所有的脊椎動物中都發(fā)現(xiàn)了卵泡閉鎖現(xiàn)象，而且絕大多數(shù)卵泡都以閉鎖的方式消失了。卵泡閉鎖是多因素參與的復雜調控過程，動物實驗已證實了某些因子的調控作用，但卵泡閉鎖的機制仍有待于進一步的研究，其對控制人類生育、提高輔助生殖助孕技術的妊娠率、提高家畜繁殖率、闡明某些與排卵障礙有關疾病的機理都具有重要

2、指導意義。本研究選用3-5mm直徑的豬卵泡，首先通過外觀判定，卵泡腔顆粒細胞計數(shù)以及卵泡液中孕酮、雌二醇比例的測定三種方法對其閉鎖程度進行分類；然后檢測了健康和早、晚期閉鎖卵泡中一系列類固醇合成酶基因以及相關激素受體基因表達量的變化，分析了這些基因表達量彼此間，及其與卵泡生理指標變化間的相關性，分析了類固醇合成酶系統(tǒng)在有腔卵泡閉鎖中的調控作用。研究結果如下：
　　 1、建立了判斷豬卵泡閉鎖程度的統(tǒng)一方法。
　　 本研究通

3、過“外觀判斷+顆粒細胞密度+孕激素/雌激素比例”三個指標綜合檢測和判定分別處于健康、早期閉鎖和晚期閉鎖三階段的卵泡。具體判斷標準包括：1）外觀標準：健康的卵泡呈清澈粉紅色，卵丘卵母細胞復合體清晰可見，顆粒細胞層完整；早期閉鎖卵泡呈較渾濁的暗橘黃色，卵丘卵母細胞復合體難以辨認，顆粒細胞層有破皺和部分脫落；晚期閉鎖的卵泡呈淺渾濁的灰色，卵丘卵母細胞復合體脫落，顆粒細胞層嚴重脫落并沉積。2）顆粒細胞密度標準：健康組密度<2500個/μL；早期

4、閉鎖組密度在2500-10000個/μL間；晚期閉鎖組密度>10000個/μL。3）激素比例標準：健康組P4/E2<5；早期閉鎖組520。
　　 2、檢測了豬卵泡閉鎖過程中類固醇激素合成酶及相關受體的基因表達量變化。
　　 本實驗提取了健康、早期閉鎖和晚期閉鎖三階段豬卵泡總RNA，利用Real TimeRT-PCR對STAR、CYP11、CYP17、HSD3β、CYP19、FSH

5、R、LHCGR、AR和PGR共9個基因的表達變化進行檢測：1）STAR在健康組中表達量較高，隨著閉鎖程度加深逐漸降低；2）CYP11在健康組中表達量較低，隨著閉鎖程度加深逐漸升高，健康、早期閉鎖兩組與晚期閉鎖組間差異顯著；3）CYP17在健康組中表達量較高，隨著閉鎖程度加深逐漸降低；4）HSD3B在健康組中表達量較低，早期閉鎖組中小幅下降，晚期閉組中升高；5）CYP19在健康組中表達量較高，隨著閉鎖程度加深逐漸降低，健康組與早、晚期兩組

6、閉鎖的卵泡間差異顯著；6）FSHR在健康組表達量較高，早期閉鎖組驟降，晚期閉鎖組有少量升高，健康組與早、晚期閉鎖兩組卵泡間差異顯署；7）LHCGR在健康組中表達量較高，早期閉鎖組降低，在晚期閉鎖組有所升高；8）PGR在健康組中表達量較低，早期閉鎖組有所下降，晚期閉鎖組中忽然升高，健康、早期閉鎖與晚期閉鎖組間差異顯著；9）AR在健康組中表達量較低，隨著閉鎖加深逐漸升高，健康、早期閉鎖兩組與晚期閉鎖組間差異顯著。
　　 3、闡明了豬

7、卵泡閉鎖過程中卵泡生理指標、類固醇激素合成酶及相關受體表達量間的相關關系。
　　 顆粒細胞密度與P、E含量比值的相關系數(shù)為0.438，呈顯著正相關；與CYP19表達量的相關系數(shù)為-0.461，呈顯著負相關；與CYP11的相關系數(shù)為0.690，呈極顯著正相關。P含量與CYP11相關系數(shù)為0.467，呈了極顯著正相關；與HSD3B的相關系數(shù)為0.539，呈極顯著正相關；與FSHR的相關系數(shù)為-0.385，呈顯著負相關；與PGR的相關

8、系數(shù)為0.368，呈顯著正相關；P含量與其他基因表達量無顯著相關性。E含量與STAR表達量的相關系數(shù)為0.456，呈顯著正相關；與CYP19的相關系數(shù)為0.446，呈顯著正相關；與LHR的相關系數(shù)為0.684，呈極顯著正相關；E與其他基因無顯著相關性。STAR與LHR的相關系數(shù)為0.575，呈極顯著正相關；CYP11與HSD3B的相關系數(shù)為0.386，呈顯著正相關；與PGR的相關系數(shù)為0.525，呈極顯著正相關：與AR的相關系數(shù)為0.3

9、69，呈顯著正相關；HSD3B與PGR的相關系數(shù)、為0.706，呈極顯著正相關；CYP19與FSHR的相關系數(shù)為0.361，呈顯著正相關；與LHR的相關系數(shù)為0.434，呈顯著正相關；AR與PGR的相關系數(shù)為0.575，呈極顯著正相關；其他基因表達量間無顯著相關性。
　　 4、分析了卵泡閉鎖幾種判定指標間的一致性
　　 外觀判斷的指標與顆粒細胞密度指標間有高度一致性；單一的雌二醇含量指標與卵泡外觀判斷的結果有顯著相關性；