豬早期閉鎖卵泡基因表達(dá)芯片分析.pdf

1、在雌性哺乳動(dòng)物卵泡發(fā)育過(guò)程中，只有極少數(shù)卵泡能發(fā)育成熟并排卵，絕大部分卵泡(70％-99％)在此過(guò)程中退化，最終被機(jī)體清除，這一過(guò)程稱(chēng)之為卵泡閉鎖。哺乳動(dòng)物卵泡發(fā)育的各個(gè)過(guò)程都有可能發(fā)生閑鎖，這是一種正常的繁殖生理過(guò)程。卵泡閉鎖是一種有多因素參與的復(fù)雜調(diào)控過(guò)程，長(zhǎng)期以來(lái)許多人都對(duì)卵泡閉鎖進(jìn)行了大量研究工作，但迄今為止調(diào)控閉鎖過(guò)程的確切分子機(jī)制仍未被完全理解，還需要進(jìn)一步的研究和探索。闡明卵泡閉鎖的分子機(jī)制對(duì)于提高動(dòng)物繁殖力、豐富繁殖理論

2、、促進(jìn)胚胎工程發(fā)展、治療人類(lèi)不孕等都有著十分重要的意義。
　　 本文的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為成熟的杜洛克×長(zhǎng)白×約克夏母豬，采用三種不同的標(biāo)準(zhǔn)，主要是外觀形態(tài)觀察和卵泡液孕激素/雌激素（P4/E2）比例綜合判定卵泡閉鎖程度，將所取卵泡分為健康、早期閉鎖、晚期閉鎖三組。
　　 為了獲得在豬卵泡閉鎖期間基因轉(zhuǎn)錄圖譜變化的綜合評(píng)價(jià)，本文用基因芯片分析不同閉鎖狀態(tài)的豬卵巢中的卵泡，然后用實(shí)時(shí)熒光定量PCR驗(yàn)證6個(gè)基因(CYP11A1，IRG

3、6，ALCAM，STAR，VEGFA，CYP19A3)的表達(dá)差異，這6個(gè)基因分別代表了3個(gè)上調(diào)基因和3個(gè)下調(diào)基因。基因芯片的數(shù)據(jù)表明，在健康卵泡中一共有12，601個(gè)探針點(diǎn)表達(dá)，在早期閉鎖卵泡中有13541個(gè)探針點(diǎn)表達(dá)，并且11858個(gè)探針點(diǎn)在健康卵泡和早期閉鎖卵泡中都有表達(dá)。在健康卵泡和早期閉鎖卵泡之間差異表達(dá)的有652個(gè)轉(zhuǎn)錄點(diǎn)，其中211個(gè)轉(zhuǎn)錄點(diǎn)上調(diào)，441個(gè)轉(zhuǎn)錄點(diǎn)下調(diào)。在652個(gè)差異表達(dá)的轉(zhuǎn)錄點(diǎn)中，有629個(gè)轉(zhuǎn)錄點(diǎn)匹配UniGen

4、e數(shù)據(jù)庫(kù)中的注釋基因，其中210個(gè)和419個(gè)轉(zhuǎn)錄點(diǎn)分別代表顯著上調(diào)和下調(diào)的獨(dú)特的基因。進(jìn)一步的GO分析顯示，這些差異表達(dá)基因參與在25個(gè)生物過(guò)程類(lèi)別中。KEGG分析表明，38個(gè)潛在的信號(hào)傳導(dǎo)通路與早期卵泡閉鎖過(guò)程相關(guān)，包括ECM-受體相互作用，粘著，TGF-β信號(hào)傳導(dǎo)通路，MAPK信號(hào)傳導(dǎo)通路，Wnt信號(hào)傳導(dǎo)通路，mTOR信號(hào)傳導(dǎo)通路，胰島素信號(hào)傳導(dǎo)通路和細(xì)胞周期等。實(shí)時(shí)RT-PCR證實(shí)了6個(gè)被選定的基因的表達(dá)模式。實(shí)時(shí)RT-PCR結(jié)果