福建省油茶主栽品種的DNA指紋鑒定.pdf

1、種質(zhì)資源的鑒定與評(píng)價(jià)是對(duì)其有效利用的基礎(chǔ)。從福建省南平、三明、龍巖、寧德和福州五個(gè)地區(qū)的17個(gè)縣市，收集了大果油茶(Camelliachekiangoleosa)、普通油茶(Camelliaoleifera)和小果油茶(Camelliameocarpa)共50份參試材料。對(duì)11種表型特征進(jìn)行表型多樣性的分析，結(jié)果表明：利用傳統(tǒng)的表型性狀來(lái)研究油茶的遺傳變異情況比較困難且具局限性，而分子標(biāo)記是研究油茶遺傳多樣性和遺傳分化的有效工具。通過(guò)建

2、立和優(yōu)化AFLP體系，對(duì)福建省油茶主栽品種的遺傳多樣性進(jìn)行研究，構(gòu)建了福建省這些油茶主栽品種的DNA指紋圖譜，以利于今后種質(zhì)資源鑒定。主要研究結(jié)果如下：
　　 1．對(duì)50份參試材料的11個(gè)表型性狀進(jìn)行測(cè)定和分析，各性狀的平均變異系數(shù)為34.13％，變異系數(shù)最大的是鮮果重，為64.88％，葉形指數(shù)和果形指數(shù)較小，分別為14.27％和9.64％，這說(shuō)明不同材料之間的鮮果重差異很大，葉形指數(shù)和果形指數(shù)是比較穩(wěn)定的性狀。11個(gè)表型性狀的

3、方差分析結(jié)果表明，果皮厚度的差異性最大，其F值為117.77。觀測(cè)的11個(gè)性狀中，果徑、鮮果重、果高、葉面積和葉形指數(shù)為主要成分。11個(gè)表型性狀的相關(guān)性分析結(jié)果表明：5對(duì)性狀呈顯著相關(guān)，27對(duì)性狀呈極顯著相關(guān)。果徑與鮮果重的相關(guān)性最為緊密，據(jù)此建立果徑-鮮果重回歸方程：Y=4.952X2-15.236X+15.831。聚類分析結(jié)果表明，50份參試材料被分為4類，第一類、第二類、第三類的46號(hào)和47號(hào)是普通油茶，第三類除46號(hào)和47號(hào)外，

4、其余13個(gè)均是小果油茶，而48號(hào)是大果油茶，單獨(dú)一類，這樣的聚類結(jié)果難以將各個(gè)材料鑒定出來(lái)。
　　 2．用接近成熟的油茶葉作為提取DNA的材料，用改良的CTAB.法，調(diào)整了PVP和β-巰基乙醇的用量，成功的提取出完整的基因組DNA。用EcoRI和MseI進(jìn)行雙酶切，結(jié)果表明，基因組DNA被酶切成彌散狀，說(shuō)明該DNA提取方法適用于AFLP分析。該方法克服了以往需用嫩葉作為提取材料這一限制，具有更廣泛的適用性和實(shí)用性。
　　

5、 3．建立并優(yōu)化一個(gè)適合油茶的AFLP最佳反應(yīng)體系。酶切體系為：DNA為150ng，EcoRI內(nèi)切酶1U,MseI內(nèi)切酶3U。連接體系為：DNA酶切液10μl,EcoRI接頭和MseI接頭各5pmol，T4-DNA連接酶7U。預(yù)擴(kuò)增體系為：DNA連接液4μ1,dNTP終濃度為0.2mmol.L-1，E0+1為2pmol，M0+1為1pmol,Mg2+終濃度為2.5mmol.L-1,rTaq聚合酶1.5U。將預(yù)擴(kuò)增產(chǎn)物稀釋60倍，吸取5μ

6、1用于下一步擴(kuò)增。選擇性體系與預(yù)擴(kuò)增體系稍微不同，E0+3為8pmol,M0+3為3pmol。選擇性擴(kuò)增產(chǎn)物用6％的變性聚丙烯酰胺電泳，電泳后采用銀染法顯色。
　　 4．從64對(duì)引物組合中篩選出8對(duì)擴(kuò)增性強(qiáng)、重復(fù)性好、帶型清晰且分布均勻的引物對(duì)50份參試材料進(jìn)行擴(kuò)增。8對(duì)引物共擴(kuò)增出313個(gè)位點(diǎn)，平均每對(duì)引物組合擴(kuò)增39.1個(gè)位點(diǎn)，多態(tài)性位點(diǎn)151個(gè)，占總位點(diǎn)數(shù)的48.24％。50份參試材料中，49號(hào)和50號(hào)的遺傳距離最小(0.

7、0094)，26號(hào)和48號(hào)的遺傳距離最大(0.2328)，平均遺傳距離為0.1236。從種源地看，閩侯與大田的遺傳距離最小(0.0412)，表明這兩地種源的親緣關(guān)系較近。聚類結(jié)果較為符合實(shí)際情況，表明AFLP技術(shù)對(duì)種質(zhì)鑒定是比較準(zhǔn)確的。
　　 5．首次將AFLP技術(shù)用于構(gòu)建福建省主栽品種的DNA指紋圖譜，每個(gè)材料的擴(kuò)增位點(diǎn)各不相同，采用二岐分類法可以將供試的材料一一分開(kāi)，可以根據(jù)構(gòu)建的指紋圖譜來(lái)鑒定各個(gè)材料。
　　 以上