致綿羊腦炎李氏桿菌在模型小鼠體內(nèi)的動(dòng)態(tài)分布及actA、inlB毒力基因的序列測(cè)定.pdf

1、李氏桿菌病(Listeriosis)是一種重要的人畜共患病原菌,主要由單核細(xì)胞增多性李氏桿菌引起。本菌對(duì)人、家畜、家禽、野生動(dòng)物均有侵襲力，可引起人及各種動(dòng)物的腦炎、敗血癥及流產(chǎn)，在公共衛(wèi)生方面有其特殊的重要性。近年來(lái)，有關(guān)LM對(duì)人及動(dòng)物的致病機(jī)理成為研究的熱點(diǎn).
　　 本研究通過(guò)對(duì)LM標(biāo)-2株和綿羊-90株LD50的測(cè)定，建立人工感染小鼠模型，采取感染后不同時(shí)間小鼠的臟器，采用PCR方法、分離培養(yǎng)及病理組織學(xué)方法對(duì)感染模型小鼠

2、體內(nèi)的李氏桿菌動(dòng)態(tài)分布及各器官的病理組織學(xué)變化進(jìn)行初步研究以并對(duì)致綿羊腦炎李氏桿菌分離株的actA和inlB毒力基因進(jìn)行了克隆及序列分析，研究結(jié)果如下：
　　 1、利用Karber法計(jì)算得知：LM標(biāo)-2株的LD50為：4.180×108CFU/ml；S-90的LD50為：2.85×108CFU/ml。表明S-90株的毒力強(qiáng)于標(biāo)-2株。
　　 2、S-90株感染后2h，脾、肝、腎、心血組織中均可檢測(cè)到李氏桿菌DNA，同時(shí)從

3、上述臟器也可分離到李氏桿菌；感染后6h大腦中可檢測(cè)到李氏桿菌DNA，并在感染后72h可分離到該細(xì)菌；感染4-6h后脾、腎、心血、肝腦即開(kāi)始出現(xiàn)病理變化和組織學(xué)變化。標(biāo)-2株則是在感染后2h，均可以從脾、肝、腎、心血、大腦中檢測(cè)到李氏桿菌，同時(shí)從脾、肝、腎、心血中可分離到該菌，感染后8h大腦中可檢測(cè)到李氏桿菌DNA，而大腦需要在72h后分離到該菌。感染6h后脾、腎、心血、肝腦即開(kāi)始出現(xiàn)病理變化和組織學(xué)變化。說(shuō)明S-90株更容易侵襲各個(gè)臟器

4、和突破血腦屏障。
　　 3、采用PCR分別擴(kuò)增致綿羊腦炎單核細(xì)胞增多性李氏桿菌和食源型單核細(xì)胞增多性李氏桿菌actA結(jié)構(gòu)基因和inlB結(jié)構(gòu)基因的部分片段，結(jié)果含有actA基因?yàn)闃?biāo)-2、S-90；含有inlB基因?yàn)闃?biāo)-2、S-90;并將含有actA結(jié)構(gòu)基因和inlB結(jié)構(gòu)基因的PCR產(chǎn)物克隆至pMD19-T載體上，通過(guò)PCR和雙酶切鑒定后進(jìn)行序列測(cè)定，測(cè)序后的序列與GenBank上相應(yīng)的序列作比較，結(jié)果顯示，含有actA結(jié)構(gòu)基因的標(biāo)