致綿羊腦炎李氏桿菌在模型小鼠體內(nèi)的動態(tài)分布及actA、inlB毒力基因的序列測定.pdf

1、李氏桿菌病(Listeriosis)是一種重要的人畜共患病原菌,主要由單核細胞增多性李氏桿菌引起。本菌對人、家畜、家禽、野生動物均有侵襲力，可引起人及各種動物的腦炎、敗血癥及流產(chǎn)，在公共衛(wèi)生方面有其特殊的重要性。近年來，有關(guān)LM對人及動物的致病機理成為研究的熱點.
　　 本研究通過對LM標-2株和綿羊-90株LD50的測定，建立人工感染小鼠模型，采取感染后不同時間小鼠的臟器，采用PCR方法、分離培養(yǎng)及病理組織學方法對感染模型小鼠

2、體內(nèi)的李氏桿菌動態(tài)分布及各器官的病理組織學變化進行初步研究以并對致綿羊腦炎李氏桿菌分離株的actA和inlB毒力基因進行了克隆及序列分析，研究結(jié)果如下：
　　 1、利用Karber法計算得知：LM標-2株的LD50為：4.180×108CFU/ml；S-90的LD50為：2.85×108CFU/ml。表明S-90株的毒力強于標-2株。
　　 2、S-90株感染后2h，脾、肝、腎、心血組織中均可檢測到李氏桿菌DNA，同時從

3、上述臟器也可分離到李氏桿菌；感染后6h大腦中可檢測到李氏桿菌DNA，并在感染后72h可分離到該細菌；感染4-6h后脾、腎、心血、肝腦即開始出現(xiàn)病理變化和組織學變化。標-2株則是在感染后2h，均可以從脾、肝、腎、心血、大腦中檢測到李氏桿菌，同時從脾、肝、腎、心血中可分離到該菌，感染后8h大腦中可檢測到李氏桿菌DNA，而大腦需要在72h后分離到該菌。感染6h后脾、腎、心血、肝腦即開始出現(xiàn)病理變化和組織學變化。說明S-90株更容易侵襲各個臟器

4、和突破血腦屏障。
　　 3、采用PCR分別擴增致綿羊腦炎單核細胞增多性李氏桿菌和食源型單核細胞增多性李氏桿菌actA結(jié)構(gòu)基因和inlB結(jié)構(gòu)基因的部分片段，結(jié)果含有actA基因為標-2、S-90；含有inlB基因為標-2、S-90;并將含有actA結(jié)構(gòu)基因和inlB結(jié)構(gòu)基因的PCR產(chǎn)物克隆至pMD19-T載體上，通過PCR和雙酶切鑒定后進行序列測定，測序后的序列與GenBank上相應(yīng)的序列作比較，結(jié)果顯示，含有actA結(jié)構(gòu)基因的標