應用信號標簽誘變技術(shù)篩選鴨疫里默氏桿菌的體內(nèi)存活相關(guān)基因.pdf

1、鴨疫里默氏桿菌感染(Riemerella anatipestifer infection)又稱為鴨傳染性漿膜炎，是家鴨、鵝、火雞及其他禽類一種接觸性傳染病。本病是當前危害全世界（尤其是中國）養(yǎng)鴨業(yè)的一種主要疾病，造成了較大的經(jīng)濟損失。其病原鴨疫里默氏桿菌是黃桿菌科里默氏桿菌屬的代表種，目前已確定的血清型至少有21個，且各血清型之間交叉保護性低或無，給本病的預防控制帶來較大困難。目前人們對鴨疫里默氏桿菌的分子致病機制還知之甚少。本研究通過

2、構(gòu)建血清1型鴨疫里默氏桿菌WJ4株攜帶不同標簽轉(zhuǎn)座子的隨機突變庫，以篩選和鑒定與鴨疫里默氏桿菌在鴨體內(nèi)存活相關(guān)的基因。
　　本研究分別構(gòu)建了鴨疫里默氏桿菌W J4株17個帶不同DNA標簽的轉(zhuǎn)座子隨機突變庫，共含有5100株突變株。先通過接種庫接種雛鴨后進行負篩選，初篩得到不能從回收庫中檢測到的突變株63株，經(jīng)多次復篩最終篩查到了20株不能從回收庫檢測到的突變株。利用反向PCR的方法對這些突變株的轉(zhuǎn)座子插入基因組中的位置序列進行了鑒

3、定，其中17株突變株已鑒定了轉(zhuǎn)座子插入的基因。
　　選取其中的兩株突變株7-295和16-284，將野生WJ4株的相應基因擴增并克隆到大腸桿菌-鴨疫里默氏桿菌穿梭表達載體pRES1上以構(gòu)建相應的互補質(zhì)粒，然后通過接合轉(zhuǎn)導的方法將互補質(zhì)粒分別導入相應的突變株中，獲得了兩株突變株的互補菌株c7-295和c16-284，最后比較野生WJ4株、突變株7-295、16-284和基因互補株c7-295、c16-284的生長曲線和菌血載量等方面

4、的生物學特性。結(jié)果表明，野生株、兩株突變株及其基因互補株的生長曲線無顯著性差異;雛鴨接種細菌后24小時，突變株7-295和16-284接種鴨的血菌載量為0，而互補株c16-284接種鴨的血菌載量較突變株有一定的回復;但回復株c7-295接種鴨的血菌載量并沒有回復。
　　本研究通過構(gòu)建鴨疫里默氏桿菌WJ4株的信號標簽轉(zhuǎn)座子突變庫，篩選到了17個潛在的與WJ4株在鴨體內(nèi)存活相關(guān)的基因，并對其中兩個突變株的部分生物學特性進行了分析。本研