基于DEV gC基因FQ-PCR方法建立及gC基因疫苗在免疫小鼠體內(nèi)分布規(guī)律的研究.pdf

1、本論文圍繞鴨病毒性腸炎病毒(DEV)gC基因檢測(cè)方法、DEV gC基因疫苗免疫小鼠后在機(jī)體的動(dòng)態(tài)分布開展了下列研究：①檢測(cè)DEV gC基因的實(shí)時(shí)熒光定量PCR(FQ-PCR)方法的建立。②將DEV gC基因疫苗(pcDNA-DEV-gC)分別以基因槍轟擊法（6μg/只、3μg/只、1μg/只），肌肉注射法（200μg/只、100μg/只、50μg/只），肌肉注射陽性脂質(zhì)體/pcDNA-DEV-gC納米粒和殼聚糖/pcDNA-DEV-gC

2、納米粒，口服陽性脂質(zhì)體/pcDNA-DEV-gC納米粒和殼聚糖/pcDNA-DEV-gC納米粒的方法免疫4周齡BALB/c小鼠，免疫后不同時(shí)間分別取各組小鼠的免疫部位（皮膚或肌肉）、心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、腦、胸腺、十二指腸、直腸和盲腸等組織器官，用建立的FQ-PCR的方法檢測(cè)pcDNA-DEV-gC在BALB/C小鼠體內(nèi)的動(dòng)態(tài)分布。獲得如下結(jié)果：
　　 1.建立的FQ-PCR檢測(cè)方法靈敏度高、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好，標(biāo)準(zhǔn)曲線

3、擴(kuò)增效率為100％，核酸模板數(shù)與FQ-PCR測(cè)定的Ct值相關(guān)系數(shù)達(dá)到1.000，具有很好的線性關(guān)系，使用方程Y=-3.321X+45.822能夠?qū)ξ粗獦悠愤M(jìn)行精確定量(Y=樣品Ct值，X=樣品拷貝數(shù)的對(duì)數(shù)值)，不僅能夠用于研究pcDNA-DEV-gC在小鼠體內(nèi)的動(dòng)態(tài)分布，而且可以用于DEV的臨床快速檢測(cè)。
　　 2.pcDNA-DEV-gC在小鼠體內(nèi)的分布規(guī)律：各免疫組免疫小鼠1h即可在各組織器官中檢測(cè)到pcDNA-DEV-gC

4、，基因槍轟擊組和肌肉注射組檢測(cè)到免疫部位含量最高，其次是肝臟、脾臟和胸腺，肌肉注射脂質(zhì)體和口服脂質(zhì)體檢測(cè)到肝臟和脾臟含量最高，肌肉注射殼聚糖和口服殼聚糖檢測(cè)到十二指腸和直腸含量最高。到18wk時(shí)，各免疫組各個(gè)組織器官內(nèi)仍然能夠檢測(cè)到pcDNA-DEV-gC的存在，但多數(shù)組織器官中的含量比免疫1h時(shí)降低了約102-104。
　　 3.不同免疫劑量與分布的關(guān)系：不同劑量pcDNA-DEV-gC免疫小鼠各組織中的含量呈現(xiàn)的總體規(guī)律為6

5、μg組＞3μg組＞1μg組，200μg組＞100μg組＞50μg組。在基因槍轟擊三個(gè)免疫劑量組中，基因疫苗的劑量與基因疫苗在小鼠組織中的含量呈現(xiàn)較弱的正相關(guān)性，各劑量之間差異不顯著(P＞0.05)。在肌肉注射三個(gè)免疫劑量組中，基因疫苗的劑量與基因疫苗在小鼠組織中的含量呈現(xiàn)正相關(guān)性，1h-3d差異顯著(P＜0.05)，3d-18wk差異不顯著(P＞0.05)。
　　 4.基因槍轟擊基因疫苗劑量很小，但在小鼠組織中檢測(cè)出的含量與肌肉