家蠶DRP和SSP基因的研究.pdf

1、蠶是重要的經(jīng)濟(jì)昆蟲，同時也是鱗翅目的模式昆蟲，蠶絲產(chǎn)業(yè)在我國擁有5000多年的悠久歷史，在社會經(jīng)濟(jì)文化生活中占有重要地位。同時，家蠶功能基因組學(xué)的研究將為全面、準(zhǔn)確地了解家蠶生物性狀的遺傳基礎(chǔ)和分子調(diào)控機制，為改善蠶絲產(chǎn)業(yè)提供理論基礎(chǔ)和技術(shù)支持，也為解明基礎(chǔ)生物學(xué)現(xiàn)象提供依據(jù)。
　　 因此，本論文課題通過實驗和生物信息學(xué)相結(jié)合的方法克隆得到了兩個家蠶基因，并對這些基因做了初步的結(jié)構(gòu)和功能分析。主要研究結(jié)論如下：
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2、.利用電子克隆方法得到了家蠶死亡相關(guān)蛋白基因(death-relatedprotein,DRP)的全長cDNA序列，并運用相關(guān)的生物信息學(xué)軟件對其進(jìn)行了分析。結(jié)果表明：該基因基因全長為761bp，開放閱讀框(ORF)長為306bp，含有2個外顯子和3個內(nèi)含子，編碼102個氨基酸，相對分子質(zhì)量約為21 kD，位于家蠶的20號染色體上，編碼的蛋白與其他物種的相應(yīng)蛋白具有較高的同源性。設(shè)計引物擴增該基因，克隆測序結(jié)果與預(yù)期一致，序列提交NCB

3、I庫(GenBank no:FJ447481)。通過RT-PCR發(fā)現(xiàn)該基因在各組織和各發(fā)育階段中均有表達(dá)。將DRP基因克隆到大腸桿菌表達(dá)載體pET30a的EcoR I和Xhol I位點中，構(gòu)建了pET30a/DRP重組載體，陽性質(zhì)粒轉(zhuǎn)化E.coli BL21，使用異丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)誘導(dǎo)DRP基因的表達(dá)，SDS-PAGE顯示，在約21kDa處出現(xiàn)一條特異的蛋白條帶。
　　 2.用生物信息學(xué)方法得到家蠶唾液蛋白

4、(salivary secreted protein，SSP)基因的序列，并且找到了該基因的全長cDNA序列。計引物擴增該基因，克隆測序結(jié)果與預(yù)期一致，序列提交NCBI庫(GenBank no:FJ79024)。利用pET-30a表達(dá)系統(tǒng)，在大腸桿菌中表達(dá)了該基因，并利用Westrn證明了表達(dá)的正確性。RT-PCR結(jié)果顯示該基因在各組織和各發(fā)育階段中都有表達(dá)。利用抗核型多角體病毒家蠶近等基因系BC8、敏感性品系306研究了SSP在家蠶抗