家蠶發(fā)育相關(guān)基因Bmvlg和Bmvis的研究.pdf

1、原生殖細(xì)胞(primordial germ cells,PGCs)是一種來源于胚胎原始生殖嵴并具有多向分化潛能的干細(xì)胞,是二倍體生物生殖細(xì)胞的前體,只短暫的存在于胚胎中,最終分化發(fā)育為生殖細(xì)胞。對于原生殖細(xì)胞的深入研究,對于體外胚胎發(fā)育研究、基因研究、基因組學(xué)研究、藥物篩選等具有重要意義。vasa基因最早在果蠅中發(fā)現(xiàn),它對極顆粒的形成和生殖細(xì)胞的發(fā)育起著至關(guān)重要的作用,已有研究表明,vasa基因突變的個(gè)體將不能生成生殖細(xì)胞。在絕大多數(shù)物

2、種中,vasa基因高度保守,且僅限在生殖細(xì)胞中特異性表達(dá),因此它可以作為一種分子標(biāo)記用于研究配子發(fā)生及原生殖細(xì)胞的起源、遷移、分化等。
　　 本文對家蠶vasa-like gene基因(Bombyxmori vasa-like gene,Bmvlg)的功能做了初步研究,構(gòu)建了由.Bmvig啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的Bmvlg和DsRed的融合表達(dá)轉(zhuǎn)基因載體,通過精子介導(dǎo)法獲得了轉(zhuǎn)基因家蠶,熒光顯微鏡觀察可檢測到明顯的熒光蠶,表明轉(zhuǎn)基因家蠶構(gòu)建

3、成功,同時(shí)在家蠶的未受精卵中可觀測到綠色熒光和紅色熒光,表明Bmwlg是一種母源性基因。將Bmvlg基因克隆到原核表達(dá)載體pET-28a(+)中,在E coli中成功表達(dá)了BmVLG,并利用鎳離子柱純化的重組蛋白免疫小鼠制備了多克隆抗體；利用該抗血清的western blotting分析結(jié)果顯示,在家蠶精巢和卵巢中檢測到了大小約為70 kDa.特異性條帶；免疫熒光細(xì)胞定位結(jié)果顯示,BmVLG蛋白主要在BmN培養(yǎng)細(xì)胞中的細(xì)胞質(zhì)中表達(dá):qR

4、T-PCR結(jié)果顯示,BmVLG基因在家蠶四齡和五齡的性腺中均有表達(dá),且無明顯差異。這些結(jié)果為進(jìn)一步研究BmVLG的功能奠定了基礎(chǔ)。Vis(Vismay)屬于TGIF家族,在果蠅中的研究表明,Vis缺失的果蠅突變體能夠存活,但是雄性果蠅表現(xiàn)出不育的表型,已有研究表明Vis是一種減數(shù)分裂阻滯基因。在家蠶中通過RT-PCR.克隆了長度為847 bp的vis基因(Bmvis)片段,并對其進(jìn)行了結(jié)構(gòu)分析和進(jìn)化樹分析；在家蠶各種組織中的表達(dá)檢測顯示