基于luxAB標記菌株的發(fā)光定量分析及其在鎘毒性檢測中的應用.pdf

1、本文系統(tǒng)研究了luxAB標記菌株的發(fā)光定量方法及其在Cd毒性檢測中的應用。研究內(nèi)容主要包括標記菌株發(fā)光定量方法的建立、不同宿主標記菌株發(fā)光性能的比較和發(fā)光細菌法在Cd毒性檢測中的應用等三個方面。結(jié)果如下： 1．以E.coli（pHN102）為研究對象，探討了luxAB標記菌株的發(fā)光定量方法以及影響其發(fā)光測定的相關因素。結(jié)果表明，該標記菌株在癸醛誘導發(fā)光后存在動態(tài)變化的發(fā)光曲線，發(fā)光強度隨時間變化先升后降。增大癸醛濃度會提高發(fā)光強

2、度，當癸醛濃度達到1％時出現(xiàn)最大發(fā)光值；供試菌株在35℃和pH 6條件下的發(fā)光強度最大；發(fā)光強度與細胞數(shù)量呈良好線性關系，r＝0.9926；細菌在對數(shù)生長后期發(fā)光強度最大，重新懸浮于新鮮培養(yǎng)液的處理能顯著提高發(fā)光強度。 2．利用三親本雜交獲取兩株標記菌株E.aerogenes NTG-01（pHN102）和P.putida X4（pHN102），并比較了不同宿主菌株在發(fā)光性能上的差別。結(jié)果表明，兩株土壤標記菌的發(fā)光強度要大于E.

3、coli（pHN102）；重懸于新鮮培養(yǎng)基的處理對土壤標記菌的光強提升效果不明顯，這反映出土壤菌具有較強的耐不良環(huán)境的能力。NTG-01（pHN102）和X4（pHN102）的最適發(fā)光條件為35℃、pH 4～8，與其最適生長條件（28℃）不一致。說明細菌發(fā)光強度不僅和代謝活性有關，而且也受到細菌熒光素酶的活性影響。 3．以E.coli（pHN102）為研究對象，摸索了其在Cd毒性檢測中的實驗條件。細菌與Cd的合適接觸時間為30m

4、in；細菌轉(zhuǎn)入無營養(yǎng)介質(zhì)中發(fā)光強度會逐漸降低，重懸于新鮮培養(yǎng)基的處理可適當提高菌株發(fā)光穩(wěn)定性。毒性檢測結(jié)果表明，細菌的相對發(fā)光度與Cd濃度存在負相關，線性回歸分析可達到1％顯著水平。Cd在LB培養(yǎng)基、M9培養(yǎng)基和水中的EC<,50>值分別為4.27mmol/L、34.8mmol/L和62μmol/L，說明Cd在水介質(zhì)中的生物毒性遠大于在LB、M9培養(yǎng)基中的毒性。 4．利用X4（pHN102）為檢測菌株，測定了不同條件下Cd的生物