基于luxAB標(biāo)記菌株的發(fā)光定量分析及其在鎘毒性檢測(cè)中的應(yīng)用.pdf

1、本文系統(tǒng)研究了luxAB標(biāo)記菌株的發(fā)光定量方法及其在Cd毒性檢測(cè)中的應(yīng)用。研究?jī)?nèi)容主要包括標(biāo)記菌株發(fā)光定量方法的建立、不同宿主標(biāo)記菌株發(fā)光性能的比較和發(fā)光細(xì)菌法在Cd毒性檢測(cè)中的應(yīng)用等三個(gè)方面。結(jié)果如下： 1．以E.coli（pHN102）為研究對(duì)象，探討了luxAB標(biāo)記菌株的發(fā)光定量方法以及影響其發(fā)光測(cè)定的相關(guān)因素。結(jié)果表明，該標(biāo)記菌株在癸醛誘導(dǎo)發(fā)光后存在動(dòng)態(tài)變化的發(fā)光曲線，發(fā)光強(qiáng)度隨時(shí)間變化先升后降。增大癸醛濃度會(huì)提高發(fā)光強(qiáng)

2、度，當(dāng)癸醛濃度達(dá)到1％時(shí)出現(xiàn)最大發(fā)光值；供試菌株在35℃和pH 6條件下的發(fā)光強(qiáng)度最大；發(fā)光強(qiáng)度與細(xì)胞數(shù)量呈良好線性關(guān)系，r＝0.9926；細(xì)菌在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)后期發(fā)光強(qiáng)度最大，重新懸浮于新鮮培養(yǎng)液的處理能顯著提高發(fā)光強(qiáng)度。 2．利用三親本雜交獲取兩株標(biāo)記菌株E.aerogenes NTG-01（pHN102）和P.putida X4（pHN102），并比較了不同宿主菌株在發(fā)光性能上的差別。結(jié)果表明，兩株土壤標(biāo)記菌的發(fā)光強(qiáng)度要大于E.

3、coli（pHN102）；重懸于新鮮培養(yǎng)基的處理對(duì)土壤標(biāo)記菌的光強(qiáng)提升效果不明顯，這反映出土壤菌具有較強(qiáng)的耐不良環(huán)境的能力。NTG-01（pHN102）和X4（pHN102）的最適發(fā)光條件為35℃、pH 4～8，與其最適生長(zhǎng)條件（28℃）不一致。說(shuō)明細(xì)菌發(fā)光強(qiáng)度不僅和代謝活性有關(guān)，而且也受到細(xì)菌熒光素酶的活性影響。 3．以E.coli（pHN102）為研究對(duì)象，摸索了其在Cd毒性檢測(cè)中的實(shí)驗(yàn)條件。細(xì)菌與Cd的合適接觸時(shí)間為30m

4、in；細(xì)菌轉(zhuǎn)入無(wú)營(yíng)養(yǎng)介質(zhì)中發(fā)光強(qiáng)度會(huì)逐漸降低，重懸于新鮮培養(yǎng)基的處理可適當(dāng)提高菌株發(fā)光穩(wěn)定性。毒性檢測(cè)結(jié)果表明，細(xì)菌的相對(duì)發(fā)光度與Cd濃度存在負(fù)相關(guān)，線性回歸分析可達(dá)到1％顯著水平。Cd在LB培養(yǎng)基、M9培養(yǎng)基和水中的EC<,50>值分別為4.27mmol/L、34.8mmol/L和62μmol/L，說(shuō)明Cd在水介質(zhì)中的生物毒性遠(yuǎn)大于在LB、M9培養(yǎng)基中的毒性。 4．利用X4（pHN102）為檢測(cè)菌株，測(cè)定了不同條件下Cd的生物