孕婦血漿中RASSF1A基因的檢測及其在子癇前期中的定量分析.pdf

1、目的：探討應(yīng)用TaqMan探針實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)檢測孕婦血漿中微量胎源性Ras相關(guān)區(qū)域家族1A(ras association domain family1A，RASSF1A)基因的可行性；對正常妊娠期間孕婦血漿中酶切前、后RASSF1A基因水平定量分析，且進(jìn)一步證實(shí)酶切后RASSF1A基因具有胎兒DNA的性質(zhì)，彌補(bǔ)遺傳基因標(biāo)志物的不足；探討其含量變化在子癇前期中的應(yīng)用價(jià)值。
　　 方法：選擇妊娠7～41周孕婦80例，其中妊娠早

2、、中、晚期及子癇前期孕婦各20例(輕、重度各10例)，另取20例健康未妊娠女性為陰性對照。提取血漿游離DNA，經(jīng)兩種甲基化敏感的限制性內(nèi)切酶HinP1I和HhaI消化處理，去除非甲基化的RASSF1A序列，保留超甲基化RASSF1A序列。應(yīng)用基于TaqMan探針的熒光定量PCR(FQ-PCR)技術(shù)測定血漿中酶切前、后RASSF1A基因的含量，分別代表總游離DNA和游離胎兒DNA水平。同時(shí)檢測β肌動蛋白(β-actin)基因，確保酶的完全

3、消化。
　　 結(jié)果：(1)80例孕婦除3例早期孕婦外，其余均檢出了酶切后RASSF1A基因，且最早可在妊娠7+3周檢測出該基因；未妊娠對照組中酶切后均未檢測到RASSF1A基因，檢測孕婦血漿中超甲基化RASSF1A基因的靈敏度和特異度分別為96.25％和100％。(2)孕婦血漿中酶切后RASSF1A基因的含量隨妊娠的進(jìn)程逐漸增加，在妊娠期間，超甲基化RASSF1A基因的平均濃度在早期妊娠組為55.52拷貝/ml，中期妊娠組為11

4、2.46拷貝/ml，晚期妊娠組為557.50拷貝/ml，分別占酶切前總游離DNA的1.78％、2.91％、9.45％。(3)子癇前期組孕婦血漿中酶切后RASSF1A基因含量為正常同期妊娠組的3.72倍，且其水平變化與子癇前期病情的嚴(yán)重程度呈正相關(guān)。(4)10例正常晚期孕婦分娩后24小時(shí)均檢測不到超甲基化RASSF1A基因，10例子癇前期孕婦分娩后24小時(shí)有8例仍能檢測到該序列，在分娩后1周檢測不到。
　　 結(jié)論：孕婦血漿中超甲基