龍須藤總黃酮的提取工藝及其固體分散體的研究.pdf

1、目的：用纖維素酶-乙醇協(xié)同提取的方法初步提取出龍須藤總黃酮，利用酶的高效專屬性破除植物細(xì)胞壁，能充分讓其黃酮類成分融入到溶液中，同樣也能更多的溶出所需的5種多甲氧基總黃酮，再利用硅膠柱色譜純化，使后續(xù)試驗(yàn)中所需的5種多甲氧基總黃酮即5,6,7,5’-四甲氧基-3’,4’-亞甲二氧基黃酮（PMF1）、5,6,7,3’,4’,5’-六甲氧基黃酮（PMF2）、5,6,7,3’,4’-五甲氧基黃酮（PMF3）、4’,5’-亞甲二氧基-5,7,3

2、’-三甲氧基黃酮（ PMF4）和5,7,3’,4’,5’-五甲氧基黃酮（PMF5）含量百分比達(dá)到50％以上，使其達(dá)到新藥注冊(cè)的標(biāo)準(zhǔn)，最后將上述5種多甲氧基黃酮成分制備成龍須藤總黃酮固體分散體，通過(guò)體外溶出試驗(yàn)測(cè)定，應(yīng)用固體分散技術(shù)能顯著增加了龍須藤總黃酮的體外溶出度，因其5種黃酮類成分目前來(lái)說(shuō)提取效率較低，通過(guò)制成固體分散體后能更充分節(jié)省原料、降低服用量、降低污染、節(jié)省更多的勞動(dòng)力。單因素的方法優(yōu)選龍須藤總黃酮固體分散體的處方，為固體分

3、散技術(shù)進(jìn)一步在中藥藥劑中的應(yīng)用提供一定的實(shí)驗(yàn)論據(jù)。
　　方法：⑴采用纖維素酶-乙醇協(xié)同提取龍須藤總黃酮，在單因素試驗(yàn)分析的基礎(chǔ)上進(jìn)行 Box-Behnken效應(yīng)面的優(yōu)化,以龍須藤總黃酮提取率為參考指標(biāo)，并采用design expert7.0.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析和處理；用紫外分光光度儀進(jìn)行檢測(cè)。⑵對(duì)提取出的龍須藤總黃酮，用乙酸乙酯進(jìn)行萃取，得到乙酸乙酯部位，并采用硅膠色譜柱方法對(duì)其乙酸乙酯部位進(jìn)行分離純化，從而獲得所需的5種多甲氧

4、基黃酮。⑶建立測(cè)定多甲氧基黃酮的含量測(cè)定的HPLC方法和方法學(xué)考察，同時(shí)通過(guò)高效液相來(lái)測(cè)定出此5種黃酮成分各自的含量和其總含量。⑷選用適宜輔料聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇4000和聚乙二醇6000，采用溶劑法和溶劑-熔融法分別制備成龍須藤總黃酮固體分散體，通過(guò)單因素的方法篩選出最適宜輔料和藥材與最適宜輔料的比值，溶出儀測(cè)其溶出度并選用高效液相檢測(cè)其含量，⑸采用紅外光譜儀和差異掃描量熱儀對(duì)制備出的固體分散體進(jìn)行表征鑒定和識(shí)別。
　　結(jié)果

5、：①纖維素酶-乙醇協(xié)同提取龍須藤總黃酮的最佳工藝條件為:酶用量9.13mg/g、酶解時(shí)間2.06h、酶解溫度51.03℃。軟件預(yù)測(cè)下的提取率為19.02%,在此條件下進(jìn)行三次重復(fù)實(shí)驗(yàn)，提取率分別為19.61%，18.98%，19.14%，平均值為19.24%，RSD為1.68%，說(shuō)明此分析方法簡(jiǎn)便且可靠。②用硅膠柱色譜和葡聚糖凝膠色譜大孔樹(shù)脂等一些常見(jiàn)分離操作，從中分離出所需的5個(gè)多甲氧基黃酮類化合物，③PMF1的線性方程為：y=525

6、9x–70054，R2=0.99986，線性范圍：13.888ng~833.28ng；PMF2的線性方程為：y=5647x-105057，R2=0.99975，線性范圍：23.865 ng~1431.9ng；PMF3的線性方程為：y=3364 x-29205,R2=0.99997，線性范圍：10.2ng~612 ng；PMF4的線性方程為：y=3895x-18524， R2=0.99948，線性范圍：5.982 ng~359.82 ng

7、；PMF5的線性方程為：y=4600 x-82390，R2=0.99995，線性范圍：19.68 ng~1180.8ng?；厥章史謩e為100.56%（ RSD=1.46%）、99.94%（ RSD=1.02%）、100.23%（ RSD=0.92%）、101.87%（RSD=2.95%）和101.10%（RSD=1.91%）。此5種總黃酮的含量依次分別占比為：17.76%、2.98%、32.31%、0.59%和18.01%，總含量為71

8、.65%。④用聚乙烯吡咯烷酮制備的龍須藤總黃酮固體分散體的累積溶出度明顯高于聚乙二醇6000和聚乙二醇4000制備的固體分散體，且累積溶出度達(dá)到81.85%。⑤對(duì)PVP K-30固體分散體紅外儀表征測(cè)定的結(jié)果為：在3524.45cm－1峰值處形成了輔料和龍須藤的特征氫鍵峰值，且羰基峰值1642.01cm－1有明顯減弱現(xiàn)象，差異掃描量熱儀表征測(cè)定的結(jié)果為：形成了龍須藤PVP K-30固體分散體，龍須藤的熔點(diǎn)峰在130℃~140℃時(shí)已全部消

9、失。
　　結(jié)論：⑴纖維素酶-乙醇協(xié)同提取龍須藤總黃酮的提取率相對(duì)于醇提法、超聲法和微波法會(huì)更高，可見(jiàn)此法能用于龍須藤中總黃酮的粗提。⑵建立了5個(gè)龍須藤多甲氧基黃酮類化合物的含量檢測(cè)方法，該方法操作簡(jiǎn)單、精密度高、重復(fù)性好、穩(wěn)定性好，可用于多甲氧基總黃酮的含量測(cè)定。⑶用PVP K-30制備的龍須藤總黃酮的固體分散體體外溶出效果更佳，且按原料藥與輔料的比例為1:6時(shí)制備出得固體分散體溶出率更高。⑷用紅外光譜儀和差異掃描量熱儀檢測(cè)出的結(jié)