洋甘菊再生體系的建立及抗炎抑菌、抗氧化作用的研究.pdf

1、洋甘菊（Matricaria chamomilla L.）又稱母菊，為菊科母菊屬（Matricaria）的一年生或多年生草本，全草香氣，含有揮發(fā)性芳香油，是一種極具開發(fā)價(jià)值的香料植物。
　　 本文首先通過植物組織培養(yǎng)技術(shù)建立洋甘菊再生體系，后運(yùn)用多因子正交試驗(yàn)優(yōu)選出較佳的揮發(fā)油提取工藝，運(yùn)用GC-MS技術(shù)對(duì)洋甘菊揮發(fā)油化學(xué)組分進(jìn)行分析，并對(duì)洋甘菊揮發(fā)油的體外抑菌、體內(nèi)抗炎及自由基的清除能力進(jìn)行了研究，旨為洋甘菊的種植、開發(fā)與利用

2、提供理論依據(jù)和技術(shù)支撐。研究成果如下：
　　 1.建立了洋甘菊再生體系。本文通過研究不同滅菌措施對(duì)洋甘菊種子萌發(fā)的影響，篩選出了適合洋甘菊種子的滅菌措施；滅菌后的種子置MS培養(yǎng)基中培養(yǎng)獲得無菌苗，以無菌苗的頂芽為外植體，研究了不同基本培養(yǎng)基、不同植物激素濃度及其組合及不同蔗糖濃度對(duì)洋甘菊不定芽增殖的影響，研究了不同植物激素濃度及其組合對(duì)不定根誘導(dǎo)影響，篩選出適合甘菊組織培養(yǎng)的最適培養(yǎng)基，建立起一套高效快速的洋甘菊離體再生體系。結(jié)

3、果表明：在研究范圍內(nèi)，適合洋甘菊種子的滅菌措施為：75％酒精30s+3.5％次氯酸鈉15min+2％次氯酸鈉10min；洋甘菊不定芽增殖的最佳培養(yǎng)基為MS+6-BA1.5 mg·L-1+NAA0.5 mg·L-1；碳源以蔗糖濃度3％最佳；適宜洋甘菊生根的最佳培養(yǎng)基為MS+IBA1.0 mg·L-1+NAA0.5 mg·L-1+6-BA0.2 mg·L-1；試管苗移栽的最適基質(zhì)為蛭石：珍珠巖：草炭（1：1：1）。
　　 2.采用水

4、蒸汽蒸餾法，以影響洋甘菊揮發(fā)油提取的四個(gè)主要因子提取時(shí)間、加水量、藥材粒徑和浸泡時(shí)間進(jìn)行正交試驗(yàn)，篩選洋甘菊揮發(fā)油提取的最佳工藝。結(jié)果表明：在研究范圍內(nèi)，花序浸泡時(shí)間6小時(shí)、加水量為洋甘菊干花序質(zhì)量的8倍、提取時(shí)間10小時(shí)、藥材粒徑為中等粒徑條件下，洋甘菊揮發(fā)油的得率最高。
　　 3.利用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（GC-MS）分析了洋甘菊揮發(fā)油的化學(xué)組分。結(jié)果表明：揮發(fā)油中鑒定了23種化合物，其中烯、烯醇、酸、醛、酮類化合物19種，

5、占總化合物相對(duì)含量的96.3％；烯和烯醇化合物占14種，占總化合物相對(duì)含量的96.19％；烷烴化合物一種，相對(duì)含量的0.30％；酸類化合物四種，相對(duì)含量為7.93％；醛類化合物占總含量的1.51％。其中，洋甘菊揮發(fā)油中最有價(jià)值的成分母菊奠的相對(duì)含量為5.31％。四氫-2,2,6-三甲基-6-（4-甲基-3-環(huán)己-1-烯）-[3S-[3a，6a（R）]]-2氫-吡喃-3-醇在揮發(fā)油中的含量最高為32.06％，四氫-a，a，5-三甲基-5-

6、（4-甲基-3-環(huán)己烷-1-基）-[2S-[2a，5B（R@]]-2-呋喃甲醇在揮發(fā)油中的含量為18.74％，2-（4-甲基烯環(huán)己烷）-1-丙醇的含量在揮發(fā)油中的含量為18.19％。含量在前三位的化合物總的相對(duì)含量的68.99％，是洋甘菊揮發(fā)油的最主要組分。
　　 4.研究了洋甘菊揮發(fā)油的抗氧化作用。結(jié)果表明：洋甘菊揮發(fā)油具有較強(qiáng)的相對(duì)還原能力，洋甘菊揮發(fā)油的濃度在0.2mL/mL時(shí)，其還原能力達(dá)到50.3％；洋甘菊揮發(fā)油的濃度

7、達(dá)到0.4mL/mL時(shí)對(duì)脂質(zhì)體過氧化物的抑制率達(dá)到47.9％；洋甘菊揮發(fā)油的濃度為0.6mL/mL時(shí)，對(duì)DPPH的清除率達(dá)到51.1％，對(duì)羥自由基的清除率達(dá)到54.4％。洋甘菊揮發(fā)油的抗氧化作用與其濃度成量效關(guān)系，其抗氧化作用隨著揮發(fā)油濃度的增加而增大。
　　 5.研究了洋甘菊揮發(fā)油體外抑菌作用。通過杯碟法研究了洋甘菊揮發(fā)油成分常見的霉菌和細(xì)菌的抑制作用，并測(cè)定了最小抑菌濃度。結(jié)果表明：洋甘菊揮發(fā)油對(duì)真菌和細(xì)菌都有一定的抑制作用

8、。對(duì)細(xì)菌的抑制作用表明：洋甘菊揮發(fā)油對(duì)細(xì)菌的抑制作用均較強(qiáng)，且洋甘菊揮發(fā)油對(duì)大腸桿菌和枯草桿菌的抑制作用強(qiáng)于對(duì)金黃色葡萄球菌的抑制作用；洋甘菊揮發(fā)油對(duì)金黃色葡萄球菌的最小抑菌濃度（MIC）值為50％，對(duì)大腸桿菌和枯草桿菌的MIC值都為25％。對(duì)霉菌的抑制作用表明：洋甘菊揮發(fā)油對(duì)根霉的抑制作用明顯高于對(duì)青霉和黑曲霉的抑制作用，其對(duì)根霉的MIC值為6.25％；而對(duì)青霉和黑曲霉的MIC值分別為50％和75％。
　　 6.通過洋甘菊揮發(fā)

9、油對(duì)蛋清致大鼠足腫脹抑制作用及對(duì)炎癥滲出液中TNF-α以及IL-Iβ含量的影響的研究、通過對(duì)棉球植入法致大鼠肉芽增生、二甲苯致小鼠耳腫脹等的抑制作用的研究，研究了洋甘菊揮發(fā)油的體內(nèi)抗炎作用。結(jié)果表明：洋甘菊揮發(fā)油各劑量組對(duì)蛋清致大鼠足腫脹均有不同程度的抑制作用。其中中劑量組在0.5h與模型對(duì)照組比較有非常顯著性差異（P<0.01），1h腫脹度與模型組相比有顯著性差異（P<0.05），大劑量組在0.5h、1h、3h模型對(duì)照組比較有顯著性差

10、異（P<0.05）。洋甘菊揮發(fā)油對(duì)蛋清致急性炎癥有一定的抑制作用。洋甘菊揮發(fā)油各劑量組對(duì)肉芽增生均有不同程度的抑制作用，肉芽?jī)糁嘏c模型對(duì)照組比較有顯著性差異，其中大劑量組肉芽濕重與模型對(duì)照組比較有非常顯著性差異。表明洋甘菊揮發(fā)油對(duì)慢性炎癥的肉芽增生有一定的抑制作用。洋甘菊揮發(fā)油各劑量組對(duì)二甲苯致小鼠耳腫脹均有不同程度的抑制作用，大量組腫脹度較模型對(duì)照組有非常顯著性差異（P<0.01）。表明洋甘菊揮發(fā)油對(duì)急性炎癥引起的腫脹、滲出有一定的抑