洋甘菊再生體系的建立及抗炎抑菌、抗氧化作用的研究.pdf

1、洋甘菊（Matricaria chamomilla L.）又稱母菊，為菊科母菊屬（Matricaria）的一年生或多年生草本，全草香氣，含有揮發(fā)性芳香油，是一種極具開發(fā)價值的香料植物。
　　 本文首先通過植物組織培養(yǎng)技術(shù)建立洋甘菊再生體系，后運用多因子正交試驗優(yōu)選出較佳的揮發(fā)油提取工藝，運用GC-MS技術(shù)對洋甘菊揮發(fā)油化學(xué)組分進(jìn)行分析，并對洋甘菊揮發(fā)油的體外抑菌、體內(nèi)抗炎及自由基的清除能力進(jìn)行了研究，旨為洋甘菊的種植、開發(fā)與利用

2、提供理論依據(jù)和技術(shù)支撐。研究成果如下：
　　 1.建立了洋甘菊再生體系。本文通過研究不同滅菌措施對洋甘菊種子萌發(fā)的影響，篩選出了適合洋甘菊種子的滅菌措施；滅菌后的種子置MS培養(yǎng)基中培養(yǎng)獲得無菌苗，以無菌苗的頂芽為外植體，研究了不同基本培養(yǎng)基、不同植物激素濃度及其組合及不同蔗糖濃度對洋甘菊不定芽增殖的影響，研究了不同植物激素濃度及其組合對不定根誘導(dǎo)影響，篩選出適合甘菊組織培養(yǎng)的最適培養(yǎng)基，建立起一套高效快速的洋甘菊離體再生體系。結(jié)

3、果表明：在研究范圍內(nèi)，適合洋甘菊種子的滅菌措施為：75％酒精30s+3.5％次氯酸鈉15min+2％次氯酸鈉10min；洋甘菊不定芽增殖的最佳培養(yǎng)基為MS+6-BA1.5 mg·L-1+NAA0.5 mg·L-1；碳源以蔗糖濃度3％最佳；適宜洋甘菊生根的最佳培養(yǎng)基為MS+IBA1.0 mg·L-1+NAA0.5 mg·L-1+6-BA0.2 mg·L-1；試管苗移栽的最適基質(zhì)為蛭石：珍珠巖：草炭（1：1：1）。
　　 2.采用水

4、蒸汽蒸餾法，以影響洋甘菊揮發(fā)油提取的四個主要因子提取時間、加水量、藥材粒徑和浸泡時間進(jìn)行正交試驗，篩選洋甘菊揮發(fā)油提取的最佳工藝。結(jié)果表明：在研究范圍內(nèi)，花序浸泡時間6小時、加水量為洋甘菊干花序質(zhì)量的8倍、提取時間10小時、藥材粒徑為中等粒徑條件下，洋甘菊揮發(fā)油的得率最高。
　　 3.利用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（GC-MS）分析了洋甘菊揮發(fā)油的化學(xué)組分。結(jié)果表明：揮發(fā)油中鑒定了23種化合物，其中烯、烯醇、酸、醛、酮類化合物19種，

5、占總化合物相對含量的96.3％；烯和烯醇化合物占14種，占總化合物相對含量的96.19％；烷烴化合物一種，相對含量的0.30％；酸類化合物四種，相對含量為7.93％；醛類化合物占總含量的1.51％。其中，洋甘菊揮發(fā)油中最有價值的成分母菊奠的相對含量為5.31％。四氫-2,2,6-三甲基-6-（4-甲基-3-環(huán)己-1-烯）-[3S-[3a，6a（R）]]-2氫-吡喃-3-醇在揮發(fā)油中的含量最高為32.06％，四氫-a，a，5-三甲基-5-

6、（4-甲基-3-環(huán)己烷-1-基）-[2S-[2a，5B（R@]]-2-呋喃甲醇在揮發(fā)油中的含量為18.74％，2-（4-甲基烯環(huán)己烷）-1-丙醇的含量在揮發(fā)油中的含量為18.19％。含量在前三位的化合物總的相對含量的68.99％，是洋甘菊揮發(fā)油的最主要組分。
　　 4.研究了洋甘菊揮發(fā)油的抗氧化作用。結(jié)果表明：洋甘菊揮發(fā)油具有較強的相對還原能力，洋甘菊揮發(fā)油的濃度在0.2mL/mL時，其還原能力達(dá)到50.3％；洋甘菊揮發(fā)油的濃度

7、達(dá)到0.4mL/mL時對脂質(zhì)體過氧化物的抑制率達(dá)到47.9％；洋甘菊揮發(fā)油的濃度為0.6mL/mL時，對DPPH的清除率達(dá)到51.1％，對羥自由基的清除率達(dá)到54.4％。洋甘菊揮發(fā)油的抗氧化作用與其濃度成量效關(guān)系，其抗氧化作用隨著揮發(fā)油濃度的增加而增大。
　　 5.研究了洋甘菊揮發(fā)油體外抑菌作用。通過杯碟法研究了洋甘菊揮發(fā)油成分常見的霉菌和細(xì)菌的抑制作用，并測定了最小抑菌濃度。結(jié)果表明：洋甘菊揮發(fā)油對真菌和細(xì)菌都有一定的抑制作用

8、。對細(xì)菌的抑制作用表明：洋甘菊揮發(fā)油對細(xì)菌的抑制作用均較強，且洋甘菊揮發(fā)油對大腸桿菌和枯草桿菌的抑制作用強于對金黃色葡萄球菌的抑制作用；洋甘菊揮發(fā)油對金黃色葡萄球菌的最小抑菌濃度（MIC）值為50％，對大腸桿菌和枯草桿菌的MIC值都為25％。對霉菌的抑制作用表明：洋甘菊揮發(fā)油對根霉的抑制作用明顯高于對青霉和黑曲霉的抑制作用，其對根霉的MIC值為6.25％；而對青霉和黑曲霉的MIC值分別為50％和75％。
　　 6.通過洋甘菊揮發(fā)

9、油對蛋清致大鼠足腫脹抑制作用及對炎癥滲出液中TNF-α以及IL-Iβ含量的影響的研究、通過對棉球植入法致大鼠肉芽增生、二甲苯致小鼠耳腫脹等的抑制作用的研究，研究了洋甘菊揮發(fā)油的體內(nèi)抗炎作用。結(jié)果表明：洋甘菊揮發(fā)油各劑量組對蛋清致大鼠足腫脹均有不同程度的抑制作用。其中中劑量組在0.5h與模型對照組比較有非常顯著性差異（P<0.01），1h腫脹度與模型組相比有顯著性差異（P<0.05），大劑量組在0.5h、1h、3h模型對照組比較有顯著性差

10、異（P<0.05）。洋甘菊揮發(fā)油對蛋清致急性炎癥有一定的抑制作用。洋甘菊揮發(fā)油各劑量組對肉芽增生均有不同程度的抑制作用，肉芽凈重與模型對照組比較有顯著性差異，其中大劑量組肉芽濕重與模型對照組比較有非常顯著性差異。表明洋甘菊揮發(fā)油對慢性炎癥的肉芽增生有一定的抑制作用。洋甘菊揮發(fā)油各劑量組對二甲苯致小鼠耳腫脹均有不同程度的抑制作用，大量組腫脹度較模型對照組有非常顯著性差異（P<0.01）。表明洋甘菊揮發(fā)油對急性炎癥引起的腫脹、滲出有一定的抑