毛細(xì)管電泳技術(shù)在畜禽肉質(zhì)參數(shù)測(cè)定中的應(yīng)用研究.pdf

1、隨著生活質(zhì)量的不斷提高，人們對(duì)飲食的關(guān)注已經(jīng)從量向質(zhì)逐漸轉(zhuǎn)移，動(dòng)物源食物的品質(zhì)，尤其是畜禽肉質(zhì)的色澤和風(fēng)味越來越受到廣大消費(fèi)者的重視，肌紅蛋白和血紅蛋白是畜禽肌肉的主要色素物質(zhì)，肌苷酸是肌肉的主要鮮味物質(zhì)，如何評(píng)定和改善畜禽肉質(zhì)對(duì)研究者們來說是一項(xiàng)持續(xù)不斷的任務(wù)。為此，本實(shí)驗(yàn)建立了畜禽肌肉中肌苷酸、肌苷、肌紅蛋白和血紅蛋白測(cè)定的高效毛細(xì)管電泳法，同時(shí)也為毛細(xì)管電泳技術(shù)在畜禽肉質(zhì)參數(shù)評(píng)定中的應(yīng)用研究提供了實(shí)踐基礎(chǔ)。
　　 1. 畜

2、禽肌肉中肌苷酸和肌苷測(cè)定的高效毛細(xì)管電泳法研究
　　 1.1 肌苷酸和肌苷測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)方法的建立
　　 本實(shí)驗(yàn)通過4因素3水平正交設(shè)計(jì)對(duì)高效毛細(xì)管電泳技術(shù)測(cè)定肌苷酸和肌苷時(shí)毛細(xì)管電泳緩沖液離子濃度、pH值、運(yùn)行電壓和溫度等條件進(jìn)行考察，建立了同時(shí)檢測(cè)肌苷酸和肌苷的高效毛細(xì)管電泳法。使用內(nèi)徑50μm×60cm未涂層熔融石英毛細(xì)管柱。在電泳緩沖液為20mmol·L-1磷酸氫二鉀-四硼酸鈉緩沖液（pH6.5），運(yùn)行電壓為22kV，

3、運(yùn)行溫度為25℃，檢測(cè)波長為248nm，進(jìn)樣壓力為0.5psi，進(jìn)樣時(shí)間為6s的工作條件下，分離檢測(cè)效果最好。
　　 1.2 畜禽肌肉中肌苷酸和肌苷前處理方法的建立
　　 本實(shí)驗(yàn)通過對(duì)提取劑濃度和離心條件的篩選，建立了畜禽肌肉中肌苷酸和肌苷提取的最佳前處理?xiàng)l件。提取劑為7％的高氯酸溶液；離心轉(zhuǎn)速為5000r·min-1；離心時(shí)間為20min。
　　 試驗(yàn)結(jié)果表明，肌苷酸和肌苷10min內(nèi)完全基線分離；方法精密度較

4、高，其含量相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為1.72％和0.96％；在0.02～0.2mg·ml-1范圍內(nèi)峰面積和濃度存在良好的線性關(guān)系，其相關(guān)系數(shù)分別為0.9999和0.9994；回收率試驗(yàn)表明前處理方法和儀器的準(zhǔn)確性均較高，其前加標(biāo)回收率和后加標(biāo)回收率分別為79.03～82.41％、74.36～80.14％和80.91～84.14％、82.75～90.00％；豬、牛、雞和鴨肉樣測(cè)定，肌苷酸含量分別為1.55±0.05、1.20±0.04、1.81±

5、0.05和1.26±0.05mg·g-1，肌苷含量分別為0.59±0.03、0.61±0.03、0.81±0.03和1.49±0.08mg·g-1。
　　 2. 畜禽肌肉中肌紅蛋白和血紅蛋白測(cè)定的高效毛細(xì)管電泳法研究
　　 2.1 肌紅蛋白和血紅蛋白測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)方法的建立
　　 本實(shí)驗(yàn)通過4因素3水平正交設(shè)計(jì)對(duì)高效毛細(xì)管電泳技術(shù)測(cè)定肌紅蛋白和血紅蛋白的電泳緩沖液離子濃度、緩沖液pH值、運(yùn)行電壓和運(yùn)行溫度等條件進(jìn)行了考

6、察，建立了同時(shí)檢測(cè)肌紅蛋白和血紅蛋白的高效毛細(xì)管電泳法。使用內(nèi)徑50μm×60cm聚丙烯酰胺涂層毛細(xì)管柱，在電泳緩沖液為50mmol·L-1檸檬酸-檸檬酸三鈉緩沖液（pH2.6），運(yùn)行電壓為22kV，運(yùn)行溫度為20℃，檢測(cè)波長為196nm，進(jìn)樣壓力為0.6psi，進(jìn)樣時(shí)間為7s的工作條件下，分離效果最佳。
　　 2.2 畜禽肌肉中肌紅蛋白和血紅蛋白前處理方法的建立
　　 本實(shí)驗(yàn)通過對(duì)提取劑和離心條件的篩選，建立了畜禽肌肉

7、中肌紅蛋白和血紅蛋白提取的最佳前處理?xiàng)l件。提取劑為10mmol·L-1 Tris-HCl，1mmol·L-1EDTA，pH8.0；離心轉(zhuǎn)速為10000r·min-1；離心時(shí)間為20min。
　　 試驗(yàn)結(jié)果表明，肌紅蛋白和血紅蛋白10min內(nèi)完全基線分離；方法精密度較高，其含量相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.69％和0.90％；在0.05～0.8mg·ml-1范圍內(nèi)峰面積和濃度存在良好的線性關(guān)系，其相關(guān)系數(shù)分別為0.9998和0.9996；

8、回收率試驗(yàn)表明前處理方法和儀器的準(zhǔn)確性均較高，其前加標(biāo)回收率和后加標(biāo)回收率分別為79.89～84.80％、79.52～83.65％和93.26～97.84％、90.32～97.46％；豬、牛、雞和鴨肉樣測(cè)定結(jié)果，肌紅蛋白含量分別為1.26±0.01、3.98±0.03、0.99±0.01和1.02±0.01mg·g-1，血紅蛋白含量分別為0.44±0.02、1.02±0.01、0.36±0.01和0.36±0.01mg·g-1。