外源多胺對(duì)鴨梨授粉受精過程中花柱蛋白質(zhì)表達(dá)的影響.pdf

1、鴨梨屬于配子體型自交不親和果樹，自花授粉結(jié)實(shí)率極低。有研究表明，在鴨梨花期噴施一定濃度的多胺可以克服鴨梨的自交不親和性，但對(duì)影響結(jié)實(shí)的重要環(huán)節(jié)授粉受精過程中花柱內(nèi)蛋白質(zhì)的變化還沒有深入研究。因此，本研究利用雙向電泳技術(shù)和質(zhì)譜分析技術(shù)，對(duì)外源多胺處理前后不同時(shí)期鴨梨花柱蛋白進(jìn)行分析，旨在尋找授粉受精過程中變化的相關(guān)蛋白，從而為多胺克服鴨梨的自交不親和性提供更充分的理論依據(jù)。主要試驗(yàn)結(jié)果如下：
　　 1.噴施不同的外源多胺，均能顯著

2、提高鴨梨自花授粉的花序坐果率和花朵坐果率。效果最佳的多胺種類和濃度分別為Put(0.25mmol/L)、Spd(0.25mmol/L)和Spm(0.05mmol/L)。
　　 2.外源多胺處理后鴨梨花柱提取液對(duì)離體花粉萌發(fā)結(jié)果表明，適宜濃度的多胺可以顯著提高鴨梨花粉萌發(fā)率和促進(jìn)花粉管的生長(zhǎng)。效果最佳的多胺種類和濃度分別為Put(0.25mmol/L)、Spd(0.25mmol/L)和Spm(0.05mmol/L)。
　　

3、 3.熒光觀察鴨梨花粉管生長(zhǎng)動(dòng)態(tài)表明，自花授粉72h后，花粉管先端膨大，在花柱中部停止生長(zhǎng)。三種多胺都能促進(jìn)鴨梨花粉管生長(zhǎng)，其中以0.25mmol/L Spd處理花粉管到達(dá)花柱基部最多。對(duì)0.25mmol/L Spd處理后的子房進(jìn)行石蠟切片觀察，發(fā)現(xiàn)在處理后72h的子房中，花粉管已伸入到胚珠，釋放精細(xì)胞。
　　 4.隨著鴨梨花柱發(fā)育的成熟，花柱中可溶性蛋白的表達(dá)發(fā)生了變化。在蕾期花柱中有三條蛋白帶（27.0kDa、37.2kDa

4、和40.0kDa）發(fā)生差異表達(dá)。與異花授粉花柱相比，在自花授粉3d的花柱中出現(xiàn)四條新的蛋白帶（18.0kDa、22.5kDa、27.4kDa和30.0kDa）。對(duì)上述處理進(jìn)一步蛋白分離，發(fā)現(xiàn)在鴨梨蕾期花柱中，蛋白點(diǎn)A（27.0kDa/pI4.8）發(fā)生了特異表達(dá)。隨著花柱發(fā)育成熟，蛋白點(diǎn)B（28.0kDa/pI5.7）表達(dá)量逐漸增強(qiáng)。隨著授粉天數(shù)的延長(zhǎng)，蛋白點(diǎn)C（28.5kDa/pI5.7）在異花授粉花柱中表達(dá)量減弱。
　　 5.

5、與自花授粉3d的花柱相比，0.25mmol/L Spd處理后3d的鴨梨花柱有兩條蛋白帶（22.5kDa和30.0kDa）沒有表達(dá)。進(jìn)一步蛋白分離發(fā)現(xiàn)，隨著授粉天數(shù)的延長(zhǎng)，蛋白點(diǎn)B在Spd處理的花柱中表達(dá)量逐漸減弱。蛋白點(diǎn)C表達(dá)量減弱直至消失。蛋白點(diǎn)D（22.0kDa/pI5.3）在自花授粉1d～3d和Spd處理后1d的花柱均有表達(dá)，而在Spd處理后2d和3d的花柱中消失。
　　 6.通過初步的質(zhì)譜分析，獲得了1個(gè)同源性較好的蛋白