中國對蝦“黃海2號”對WSSV的抗病性分析.pdf

1、自1993年白斑綜合征病毒(WSSV)病暴發(fā)以來,我國對蝦養(yǎng)殖業(yè)受到重創(chuàng)。培育高產(chǎn)、抗病新品種是我國對蝦養(yǎng)殖業(yè)有望走出困境的重要途徑?！包S海2號”中國對蝦是我國培育出的第一個具有多個優(yōu)良性狀(生長快、抗WSSV性能強、養(yǎng)殖存活率高)的對蝦養(yǎng)殖新品種,于2008年通過國家新品種委員會審定,該品種在一定程度上緩解和控制了WSSV疾病的危害。本文簡介了“黃海2號”良種的培育過程,重點分析了“黃海2號”抗WSSV遺傳參數(shù)和遺傳進展、并與商業(yè)苗種

2、進行了性狀比對;同時探討了WSSV在中國對蝦體內(nèi)的擴增模式及基于新一代454規(guī)模測序技術(shù)的“黃海2號”中國對蝦的EST序列特征,以期為進一步研究抗WSSV分子機理、提高中國對蝦抗WSSV性能及加快中國對蝦抗病選育進展提供理論基礎(chǔ)。獲得的主要研究結(jié)果為:
　　 1、中國對蝦“黃海2號”抗WSSV新品種培育
　　 選取中國對蝦“黃海1號”和“即抗98”2個養(yǎng)殖群體和5個自然群體,通過不平衡巢式交配設(shè)計方案,建立中國對蝦育種基

3、礎(chǔ)群體。然后經(jīng)過家系標準化培育、目標性狀測試、遺傳參數(shù)估計及綜合選擇指數(shù)計算(BLUP法結(jié)合REML方法)、最后制定配種方案等環(huán)節(jié)實現(xiàn)中國對蝦各性狀的綜合選育。依據(jù)2007-2009年中國對蝦抗WSSV性狀測試數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn)抗WSSV性狀的遺傳力極低,僅為0.017-0.026,屬于低等遺傳力;抗WSSV性狀每年獲得的遺傳進展分別為6.38％、9.74％和6.78％。2008年黃海2號”與商品苗種對比測試結(jié)果顯示,在相同的條

4、件下,抗WSSV性狀分別比山東昌邑、山東日照和河北商業(yè)苗種高12.25％、14.59％和20.70％。
　　 2、“黃海2號”感染W(wǎng)SSV后體內(nèi)病毒定量分析
　　 采用TaqMan熒光定量PCR方法,以人工感染W(wǎng)SSV的“黃海2號”中國對蝦為測試對象,對感染早期、高峰期、后期死亡及存活的對蝦進行了病毒含量的檢測,WSSV含量分別為8.8×104-1.5×105、4.4×105-1.2×106、8.5×105-4.6×10

5、6 copy/ng DNA,死亡個體的WSSV平均含量為9.5×105 copy/ng DNA;存活個體的病毒攜帶量平均值為2.2×105 copy/ng DNA,但個體間差別極大,只有18.2％的個體病毒含量超過10000個拷貝/ng DNA,而52.3％的個體病毒含量低于100 copy/ng DNA。統(tǒng)計結(jié)果顯示,“黃海2號”中國對蝦感染W(wǎng)SSV后的存活時間長,具有較強的抗WSSV能力。
　　 3、WSSV感染中國對蝦后體

6、內(nèi)病毒繁殖特征分析
　　 采用熒光定量PCR方法,對人工感染W(wǎng)SSV后不同時間采集的中國對蝦樣品進行WSSV含量檢測,實時、動態(tài)觀察感染后的病毒增殖變化。對蝦感染后120小時內(nèi)的8次統(tǒng)計數(shù)據(jù)顯示,對蝦體內(nèi)病毒數(shù)量一直呈現(xiàn)上升狀態(tài),其趨勢與單位時間死亡對蝦占存活對蝦比例的曲線趨勢基本一致:當病情穩(wěn)定、無對蝦繼續(xù)死亡時,存活的中國對蝦中超過80％的個體病毒含量均下降到感染初始狀態(tài)。據(jù)此推斷出三種WSSV在對蝦體內(nèi)擴增模式。
　

7、　 4、“黃海2號”感染W(wǎng)SSV后的EST差異分析,
　　 采用新一代高通量測序技術(shù)-Roche 454 GS FLX系統(tǒng)對“黃海2號”中國對蝦的WSSV抗性和敏感材料進行了轉(zhuǎn)錄組測序。共獲得451,637條高質(zhì)量序列,平均長度212bp,總堿基數(shù)95,583,417 bp。利用CAP3軟件對所有高質(zhì)量序列進行拼裝,獲得48,681個單基因(Unigene),包括18,560個序列簇(Contig)和30,121條獨立序列(S

8、ingleton),其中71.23％為新序列。將抗性組與敏感組序列分別拼裝后相互比對,在抗性組和敏感組中分別發(fā)現(xiàn)16,790和12,573條特異序列,不考慮Singleton情況下,WSSV抗性特異序列中有968個contigs具有蛋白注釋,其中427個還具有相應(yīng)基因功能注釋;WSSV敏感序列中有1156個contigs具有蛋白注釋,其中465個具有基因功能注釋。在18,560個contig中共發(fā)現(xiàn)71,724個可能的SNP,位于編碼區(qū)