中國(guó)對(duì)蝦“黃海2號(hào)”對(duì)WSSV的抗病性分析.pdf

1、自1993年白斑綜合征病毒(WSSV)病暴發(fā)以來(lái),我國(guó)對(duì)蝦養(yǎng)殖業(yè)受到重創(chuàng)。培育高產(chǎn)、抗病新品種是我國(guó)對(duì)蝦養(yǎng)殖業(yè)有望走出困境的重要途徑。“黃海2號(hào)”中國(guó)對(duì)蝦是我國(guó)培育出的第一個(gè)具有多個(gè)優(yōu)良性狀(生長(zhǎng)快、抗WSSV性能強(qiáng)、養(yǎng)殖存活率高)的對(duì)蝦養(yǎng)殖新品種,于2008年通過(guò)國(guó)家新品種委員會(huì)審定,該品種在一定程度上緩解和控制了WSSV疾病的危害。本文簡(jiǎn)介了“黃海2號(hào)”良種的培育過(guò)程,重點(diǎn)分析了“黃海2號(hào)”抗WSSV遺傳參數(shù)和遺傳進(jìn)展、并與商業(yè)苗種

2、進(jìn)行了性狀比對(duì);同時(shí)探討了WSSV在中國(guó)對(duì)蝦體內(nèi)的擴(kuò)增模式及基于新一代454規(guī)模測(cè)序技術(shù)的“黃海2號(hào)”中國(guó)對(duì)蝦的EST序列特征,以期為進(jìn)一步研究抗WSSV分子機(jī)理、提高中國(guó)對(duì)蝦抗WSSV性能及加快中國(guó)對(duì)蝦抗病選育進(jìn)展提供理論基礎(chǔ)。獲得的主要研究結(jié)果為:
　　 1、中國(guó)對(duì)蝦“黃海2號(hào)”抗WSSV新品種培育
　　 選取中國(guó)對(duì)蝦“黃海1號(hào)”和“即抗98”2個(gè)養(yǎng)殖群體和5個(gè)自然群體,通過(guò)不平衡巢式交配設(shè)計(jì)方案,建立中國(guó)對(duì)蝦育種基

3、礎(chǔ)群體。然后經(jīng)過(guò)家系標(biāo)準(zhǔn)化培育、目標(biāo)性狀測(cè)試、遺傳參數(shù)估計(jì)及綜合選擇指數(shù)計(jì)算(BLUP法結(jié)合REML方法)、最后制定配種方案等環(huán)節(jié)實(shí)現(xiàn)中國(guó)對(duì)蝦各性狀的綜合選育。依據(jù)2007-2009年中國(guó)對(duì)蝦抗WSSV性狀測(cè)試數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn)抗WSSV性狀的遺傳力極低,僅為0.017-0.026,屬于低等遺傳力;抗WSSV性狀每年獲得的遺傳進(jìn)展分別為6.38％、9.74％和6.78％。2008年黃海2號(hào)”與商品苗種對(duì)比測(cè)試結(jié)果顯示,在相同的條

4、件下,抗WSSV性狀分別比山東昌邑、山東日照和河北商業(yè)苗種高12.25％、14.59％和20.70％。
　　 2、“黃海2號(hào)”感染W(wǎng)SSV后體內(nèi)病毒定量分析
　　 采用TaqMan熒光定量PCR方法,以人工感染W(wǎng)SSV的“黃海2號(hào)”中國(guó)對(duì)蝦為測(cè)試對(duì)象,對(duì)感染早期、高峰期、后期死亡及存活的對(duì)蝦進(jìn)行了病毒含量的檢測(cè),WSSV含量分別為8.8×104-1.5×105、4.4×105-1.2×106、8.5×105-4.6×10

5、6 copy/ng DNA,死亡個(gè)體的WSSV平均含量為9.5×105 copy/ng DNA;存活個(gè)體的病毒攜帶量平均值為2.2×105 copy/ng DNA,但個(gè)體間差別極大,只有18.2％的個(gè)體病毒含量超過(guò)10000個(gè)拷貝/ng DNA,而52.3％的個(gè)體病毒含量低于100 copy/ng DNA。統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示,“黃海2號(hào)”中國(guó)對(duì)蝦感染W(wǎng)SSV后的存活時(shí)間長(zhǎng),具有較強(qiáng)的抗WSSV能力。
　　 3、WSSV感染中國(guó)對(duì)蝦后體

6、內(nèi)病毒繁殖特征分析
　　 采用熒光定量PCR方法,對(duì)人工感染W(wǎng)SSV后不同時(shí)間采集的中國(guó)對(duì)蝦樣品進(jìn)行WSSV含量檢測(cè),實(shí)時(shí)、動(dòng)態(tài)觀察感染后的病毒增殖變化。對(duì)蝦感染后120小時(shí)內(nèi)的8次統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示,對(duì)蝦體內(nèi)病毒數(shù)量一直呈現(xiàn)上升狀態(tài),其趨勢(shì)與單位時(shí)間死亡對(duì)蝦占存活對(duì)蝦比例的曲線趨勢(shì)基本一致:當(dāng)病情穩(wěn)定、無(wú)對(duì)蝦繼續(xù)死亡時(shí),存活的中國(guó)對(duì)蝦中超過(guò)80％的個(gè)體病毒含量均下降到感染初始狀態(tài)。據(jù)此推斷出三種WSSV在對(duì)蝦體內(nèi)擴(kuò)增模式。
　

7、　 4、“黃海2號(hào)”感染W(wǎng)SSV后的EST差異分析,
　　 采用新一代高通量測(cè)序技術(shù)-Roche 454 GS FLX系統(tǒng)對(duì)“黃海2號(hào)”中國(guó)對(duì)蝦的WSSV抗性和敏感材料進(jìn)行了轉(zhuǎn)錄組測(cè)序。共獲得451,637條高質(zhì)量序列,平均長(zhǎng)度212bp,總堿基數(shù)95,583,417 bp。利用CAP3軟件對(duì)所有高質(zhì)量序列進(jìn)行拼裝,獲得48,681個(gè)單基因(Unigene),包括18,560個(gè)序列簇(Contig)和30,121條獨(dú)立序列(S

8、ingleton),其中71.23％為新序列。將抗性組與敏感組序列分別拼裝后相互比對(duì),在抗性組和敏感組中分別發(fā)現(xiàn)16,790和12,573條特異序列,不考慮Singleton情況下,WSSV抗性特異序列中有968個(gè)contigs具有蛋白注釋,其中427個(gè)還具有相應(yīng)基因功能注釋;WSSV敏感序列中有1156個(gè)contigs具有蛋白注釋,其中465個(gè)具有基因功能注釋。在18,560個(gè)contig中共發(fā)現(xiàn)71,724個(gè)可能的SNP,位于編碼區(qū)