中國對蝦選育群體的抗病特征分析.pdf

1、本研究針對中國對蝦選育群體抗白斑綜合征病毒(White Spot-Syndrome Vires，WSSV)的特征進(jìn)行了研究。 通過對不同中國對蝦家系自然感染W(wǎng)SSV的抗病力比較，分析中國對蝦各家系和雜交組合在自然養(yǎng)殖狀態(tài)下對WSSV的抗病力。1個(gè)包括42個(gè)全同胞家系的中國對蝦選育群體，熒光標(biāo)記后每個(gè)家系各取40尾健康個(gè)體混養(yǎng)。發(fā)病1周后將所有個(gè)體取出，統(tǒng)計(jì)各家系的存活率：利用巢式聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase Chain

2、Reaction，PCR)，對存活個(gè)體進(jìn)行WSSV檢測。存活率的分析結(jié)果顯示：4個(gè)家系的存活率在60％以上，7個(gè)家系的存活率在20％以下；存活率與存活個(gè)體的、WSSV檢測第一次擴(kuò)增陽性率、第二次擴(kuò)增陽性率負(fù)相關(guān)，檢驗(yàn)不顯著；但是，第一次擴(kuò)增陽性率與第二次擴(kuò)增陽性率呈極顯著正相關(guān)(P<0.01)。進(jìn)一步分析表明：青島野生群體內(nèi)自交產(chǎn)生的一個(gè)家系和韓國群體養(yǎng)殖家系與乳山野生群體雜交產(chǎn)生的一個(gè)家系在抗病力上顯著優(yōu)于其它家系；經(jīng)獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)表

3、明，群體間交配組合的存活率差異不顯著：然而，多重比較結(jié)果發(fā)現(xiàn)，韓國群體養(yǎng)殖家系(♂)與乳山野生群體(♀)雜交后代的存活率(56.20±8.75)顯著高于韓國群體養(yǎng)殖家系自交后代(22.50±2.50)(P<0.05)，說明該雜交后代在抗WSSV方面有一定程度的雜種優(yōu)勢，而韓國群體養(yǎng)殖家系(♂)和乳山野生群體(♀)的雜交后代所表現(xiàn)的雜種優(yōu)勢(26.95)與其反交后代(3.85)差異顯著。表明中國對蝦抗WSSV的雜交優(yōu)勢有待更進(jìn)一步的研究確

4、認(rèn)。 本研究還通過對中國對蝦自然感染與人工感染各家系對WSSV抗病力的比較，探討了兩種感染方式實(shí)驗(yàn)對中國對蝦抗病力的反映情況。數(shù)據(jù)采自相同的30個(gè)家系，每個(gè)家系分成2組，人工感染實(shí)驗(yàn)組的死亡情況每2小時(shí)記錄1次。依據(jù)自然感染實(shí)驗(yàn)組的死亡情況，取兩實(shí)驗(yàn)組平均存活率在35％左右時(shí)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。用四格表的卡方檢驗(yàn)分析中國對蝦各家系存活率，結(jié)果發(fā)現(xiàn)23個(gè)家系的存活率在兩種感染方式實(shí)驗(yàn)間差異不顯著(P>0.05)，兩種感染方式實(shí)驗(yàn)間家系存

5、活率一致性為77％。用獨(dú)立樣本，檢驗(yàn)對兩種感染方式實(shí)驗(yàn)中4個(gè)雜交組合的存活率進(jìn)行比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)4個(gè)雜交組合的存活率在兩種感染方式實(shí)驗(yàn)間差異不顯著(P>0.05)，說明人工感染和自然感染實(shí)驗(yàn)對中國對蝦抗病力的反映情況基本是一致的。另外，無論是在人工感染實(shí)驗(yàn)中，還是在自然感染實(shí)驗(yàn)中，5個(gè)家系的存活率顯著高于樣本總體存活率表現(xiàn)較強(qiáng)的抗病力，表明家系選育可能是進(jìn)行抗WSSV品種選育的重要途徑。 對中國對蝦兩個(gè)抗病力不同的群體進(jìn)行RAPD

6、分析，尋找中國對蝦與抗病相關(guān)的遺傳標(biāo)記，并分析兩個(gè)群體的遺傳差異。即對人工選育的29個(gè)中國對蝦半同胞家系進(jìn)行人工感染W(wǎng)SSV后，選取存活時(shí)間最長和存活時(shí)間最短各29個(gè)個(gè)體，組成抗病群體(the longest survival time，LST)和感病群體(the shortest survival time，SST)。用400個(gè)隨機(jī)引物進(jìn)行RAPD分析，得到與抗病正相關(guān)的特異性遺傳標(biāo)記5個(gè)，與抗病負(fù)相關(guān)的特異性遺傳標(biāo)記2個(gè)。對14個(gè)隨

7、機(jī)引物在兩個(gè)群體的擴(kuò)增位點(diǎn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，共得到82個(gè)位點(diǎn)，其中多態(tài)位點(diǎn)34個(gè)，占41.46％，兩個(gè)群體的多態(tài)位點(diǎn)比例分別為40.24％和37.8％。Shannon's多樣性指數(shù)估算兩個(gè)群體的平均遺傳多態(tài)度為0.2177，LST群體的遺傳多態(tài)度為0.2190，略高于SST群體0.2163；群體內(nèi)的遺傳變異(Hpop/Hsp)0.9645，可見96.45％的遺傳變異來自于群體內(nèi)，3.55％的變異來源于群體間。統(tǒng)計(jì)各座位的基因頻率計(jì)算出兩個(gè)群體的